2、淀粉酶活性的测定描述.ppt

* * 实验04 一、目的 二、原理 淀粉 α-淀粉酶（内切酶） β-淀粉酶（外切酶） 麦芽糖等寡聚糖 麦芽糖 3，5-二硝基水杨酸 3-氨基-5- 硝基水杨酸 （棕红色） 淀粉酶的作用机制及产物显色原理： 淀粉酶活性大小的表示方法： 淀粉酶活性的大小与产生的还原糖的量成正比。以单位质量样品单位时间生成的还原糖的量表示。 测定α-淀粉酶和β-淀粉酶： α-淀粉酶不耐酸， β-淀粉酶不耐热，本实验采用70。C保温15min钝化β-淀粉酶而测出α-淀粉酶。总活力减去α-淀粉酶活力则为β-淀粉酶活力。 三、材料、仪器设备及试剂 材料：萌发的小麦种子（芽长1cm） 仪器设备：分光光度计、恒温水浴、刻度试管、 容量瓶 试剂： 1、标准麦芽糖溶液（1mg/mL） 2、3，5-二硝基水杨酸（含NaOH） 3、1%淀粉溶液 四、实验步骤 2、酶液制备 称取1g萌发的小麦种子 加少量蒸馏水 研磨  转入100 mL容量瓶 定容 放置15min  过滤 淀粉酶原液（酶液Ⅰ） 取酶液Ⅰ 10 mL于50 mL容量瓶，用蒸馏水定容 至刻度，摇匀，即为淀粉酶稀释液（酶液Ⅱ） 1、麦芽糖标准曲线的制作 A540=0.264x-0.052 (x为mg麦芽糖） 3、酶活力的测定 取4支干净的具塞刻度试管，编号，按下表操作： 摇匀，沸水浴中5min，取出流水冷却，加蒸馏水至20mL。摇匀，540nm比色测定。 操作项目 管号  Ⅰ-1 Ⅰ-2 Ⅱ-1 Ⅱ-2 淀粉酶原液（酶液Ⅰ）/mL 1.0 1.0 0 0 钝化β-淀粉酶 置70。C水浴中15min，取出后流水冷却 淀粉酶稀释液（酶液Ⅱ）/mL 0 0 1.0 1.0 3，5-二硝基水杨酸/ mL 2.0 0 2.0 0 预保温 40。C恒温水浴中保温10min 1%淀粉溶液/ mL（ 40。C ） 1.0 1.0 1.0 1.0 保温 40。C恒温水浴中保温5min 3，5-二硝基水杨酸/ mL 0 2.0 0 2.0 空白管： 2 mL蒸馏水 + 2 mL3，5-二硝基水杨酸，沸水浴5min，定容至20 mL *