2.2.1-动物细胞培养和核移植技术描述.ppt

动物细胞工程 动物细胞工程 其中，动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 动物细胞工程常用的技术手段 动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 生产单克隆抗体 烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。 但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？ 思考？ 取该患者的皮肤进行细胞培养,获得人造皮肤后再移植。 （一）、概念 是指从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 （二）、原理 细胞分裂增殖 一、动物细胞培养 (三)、动物细胞培养过程 取动物组织块 剪碎组织 胰蛋白酶处理 细胞培养 单个细胞 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础 剪碎组织 及胰蛋白酶处理的目的？ 剪碎组织及胰蛋白酶处理的目的：将组织分散成单个细胞，有利于细胞与培养液充分接触，便于培养。 制成细胞悬液 动物胚胎或幼龄动物器官 因为这些组织或器官，分裂能力旺盛，易于培养。 （四）动物细胞生长特性 1.细胞贴壁：细胞悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 要求：培养瓶或培养 皿的内表面光滑 无毒、易于贴附。 2.接触抑制 接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 50代以后 失去接触抑制 接触抑制 （细胞为单层） 50代以后细胞失去接触抑制 原代培养： 人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。 传代培养： 贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖。这样的培养过程通常被称为传代培养。 培养过程： 动物胚胎或幼龄动物的细胞、组织或器官 细胞悬浮液 →原代培养 传代培养 10代细胞 50代细胞 无限传代 单个细胞 胰蛋白酶 加培养液 剪碎 细胞贴壁 剥离 分瓶 部分细胞的细胞核型发生变化 动物细胞培养最终不能培养成动物体 接触抑制 培养器皿  超净工作台 实验设备 细胞培养箱 倒置显微镜 （五）、动物细胞培养条件 1、无菌、无毒的环境 （①添加一定量的抗生素；②定期更换培养液） 2、营养 （葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等） 3、温度和PH 温度36.5+0.5度，pH7.2～7.4 4、气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） （使用合成培养基时，需加入血清、血浆等） 补充合成培养基中缺乏的物质，如血清激素、氨基酸等。 CO2有调节PH的作用。 思考与讨论 1、进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？ 2、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 主要是蛋白质。 不行，因为动物细胞培养适宜PH为7.2—7.4，而胃蛋白酶适宜PH为2.0，胃蛋白酶会失去活性。 长时间会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用。所以应控制好胰蛋白酶的消化时间。 P44 3、动物细胞培养液与植物组织培养基相比，有何独特之处？ 4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？ 动物细胞培养液的独特之处有： 1、液体培养基 2、成分中有动物血清等 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体 植物组织培养和动物细胞培养的比较 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 细胞的全能性 细胞增殖 培养基性质 固体培养基 液体培养基 培养基特有成分 蔗糖 植物激素 葡萄糖 动物血清 培养结果 植物体 细胞数目增多 培养目的 快速繁殖、培育无病毒植株 获得细胞或细胞分泌蛋白 动物细胞培养技术的应用 生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等 健康细胞培养：如获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。 用于检测有毒物质 用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据 P50 动物细胞培养要经过脱分化过程吗？为什么？ 不经过。因为高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力。 1. 概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。 核移植 受体细胞： 胚胎细胞核移植： 体细胞核移植： 细胞分化程度低，恢复全能性容易 用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。 2.原理：动物体细胞核的全能性。 （难度高） MⅡ期的卵母细胞 选用去核卵母细胞的原因：①卵母细胞比较大，容易操作；②细胞质多，营养丰富，含有促进细胞核全能性表达的物质。 ②胚胎移植 ①动物细胞核移