2.免疫球蛋白描述.ppt

噬菌体展示技术（phage display) 用丝状噬菌体（M13或Fd）： （1）编码外壳蛋白III基因处插入外来基因，采用噬菌体展示技术表达。 （2）通过‘吸附-洗脱-扩增’富集性选择过程。 转入基因的M13 抗原包被的固相载体 洗涤（去掉不表达特异Ab 的M13） 洗脱 扩增 吸附 抗体库的富集筛选 优点：与杂交瘤技术制备单克隆抗体相比 1.可以不用免疫而直接获取人源性抗体 人淋巴细胞→mRNA→cDNA→PCR扩增H/L链基因 →克隆到丝状噬菌体 2.筛选范围大 3.快速 抗体库的构建 八、人工制备抗体 转基因鼠(xenomouse)产生人单抗将编码人Ig基因片段转到自身Ig位点己灭活的小鼠基因组中,使转基因鼠产生高亲和力的人抗体。 九、抗体的应用 科学研究 诊断 预防 治疗 破伤风 * 七、免疫球蛋白基因：基因重排 VDJ 基因重组的结果：促进免疫球蛋白基因的转录 七、免疫球蛋白基因：类别转换 ⑴ 缺失模型 ⑵ RNA的可变剪接 七、免疫球蛋白基因 七、免疫球蛋白基因 膜表面Ig（SmIg）和分泌型Ig的基因重排 SmIg和分泌性Ig的H链结构相类似，所不同的是SmIg的羧基端多含一段穿膜的疏水性氨基酸残基和胞浆区。因此SmIgH链的转录本（transcript）要比分泌性IgH链转录本多1～2个外显子。 膜型和分泌型Ig重链基因的结构和重排相同，但在RNA水平上的剪接有所不同。 七、免疫球蛋白基因 等位基因排斥现象：早期成熟B细胞只表达Ig两个等位基因中的一个。 轻链同种型排斥：每个B细胞合成两型轻链中的一种。 Ig 多样性的机制 * 组合多样性 * 连接多样性 * 体细胞高频突变（B细胞） 1. 组合多样性：V/D/J/ 的组合及轻重链的组合 肽链 组合多样性 连接多样性 VH VH65 x DH30 x JH6=11700 Vk Vk50 x Jk5 =250 Vl Vl30 x Jl4 = 120 L 250+120 = 370 H+L 2.5 x 108 3 x 107 总计 1014 组合多样性 2. 连接多样性：发生于胚系基因 CDR3区位于V/J或V/D/J片段连接处，两个片段之间的连接点不同或丢失或插入数个核苷酸及倒转。 3. 体细胞高频突变造成的多样性： 成熟B细胞在受到抗原刺激后，在生发中心发生体细胞高频突变，多发生在Ig的CDR区，若干核苷酸替换突变，利于提高抗体与抗原的亲和力。 七、免疫球蛋白基因 免疫球蛋白的多样性 连接多样性: P-核苷酸插入 N-核苷酸插入 Junctional diversity Junctional diversity 八、人工制备抗体 多克隆抗体（polyclonal antibody） 单克隆抗体（monoclonal antibody） 基因工程抗体（gene engineering Ab） 八、人工制备抗体 多克隆抗体（polyclonal antibody） 用含多种抗原决定簇的抗原物质免疫动物，刺激多个B细胞克隆所获得的免疫血清（含多种抗体的混合物），此为多克隆抗体。 来源广泛，制备容易；特异性不高，易产生交叉反应 带有多个表位 抗原 针对不同表位的B细胞 克隆增殖 多种抗体的混合物 （多克隆抗体） 刺激小鼠 八、人工制备抗体 单克隆抗体 单个B细胞克隆增殖产生的只针对某一特定抗原决定基的抗体称为单克隆抗体（monoclonal antibody，mAb），单克隆抗体通过杂交瘤技术制备 所制备的高度均一（属同一类、亚类、型别），单一特异性（仅针对特定抗 原表位）的抗体，可大量生产。 鼠源单克隆抗体可诱导人体产生人抗鼠抗体 Georeges Kohler and Cesar Milstein, 1984, monoclonal antibod