培训课件--分子流行病学的研.ppt

四株肺炎克雷伯菌的药敏 1 2 3 4 亚胺培南 16 16 16 16 厄他培南 16 16 16 16 头孢西丁 =64 =64 =64 =64 头孢匹汚 =64 =64 =64 =64 头孢曲松 =4 =4 =4 =4 妥布霉素 4 4 4 4 头孢他啶 =16 =16 =16 =16 氨曲南 =64 =64 =64 =64 头孢他啶 =64 =64 =64 =64 环丙沙星 =64 =64 =64 =64 哌拉西林他唑巴坦 =128 =128 =128 =128 左氧氟沙星 =64 =64 =64 =64 氨苄西林 =32 =32 =32 =32 氨苄西林，舒巴坦 =32 =32 =32 =32 KB(mm） 2163 2193 2085 2011 多粘菌素B 20 20 21 20 美罗培南 15 15 15 15 头孢哌酮 舒巴坦 6 6 6 6 耐药菌的基因型分析 1.为阳性对照（KPC-2) 2.肺克（患者痰） 3.肺克（患者血） 4.肺克（隔壁床患者痰） 5.肺克（病房拖把） 6.为阴性对照 Mark 聚类分析 院感及时控制因素 及时发现 医务人员的重视 ICU 环境因素(单房间,单独护理) 环境的消毒措施有效 半年内未出现耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌 KPC酶 水解亚胺培南或美罗培南（是目前临床上控制革兰阴性菌感染的最有效的抗菌药物）的一类β内酰胺酶 属于功能分类法的2f组，A类，可被克拉维酸抑制，不被乙二胺四乙酸（EDTA）所抑制 现已报道的KPC亚型共12种亚型 在中国主要见于浙江 产KPC酶耐药菌的传播 研究认为，blaKPC位于一种新型的Tn3型的转座子Tn4401上， 其转座子的结构是KPC基因转移的原因 这种新型的转座子结构可以使blaKPC从其原始位置转移至各类不同的质粒 同时认为转座子Tn4401是一个复合转座子，由2次序列插入形成 产KPC酶耐药菌 有限的DNA指纹和脉冲凝胶电泳资料显示产KPC酶的肠杆菌科细菌易发生医院感染的暴发流行 最早在美国、特别在美国的东北部各州蔓延，并造成局部地区暴发流行 以后几年再世界各地都有报告 脉冲场凝胶电泳（PFGE) 对基因组的DNA酶切片段多态性进行同源性分析，是短期院内感染爆发流行判断的金标准 是一种分离大分子DNA的方法 耐碳青酶烯肠杆菌科细菌 2007年下半年零星出现(肺克) 2010年1-8月收集到18株.包括肺克克雷伯菌（15）大肠埃希菌（1）阴沟肠杆菌（1）枸橼酸杆菌（1） 产KPC-2肺克同源性分析(2010.1-8) 流行病学分析 A型传播源头:患者来自上海某医院，转至我院重症监护室，入院次日做痰培养，检出亚胺培南耐药的肺克。后转入康复科，耐药菌一直被检测到。A型患者分布于重症监护室，康复科，血液科。 B型和C型的七名患者住我院某外科。B型的五名患者在分离出该耐药菌前未使用过碳青霉烯类抗生素，推测是院内环境感染所致 C型的两名患者，源头的患者住院时间长达121天，在分离出该菌之前，美罗培南使用时间近二十天，推测C型可能是抗生素筛选的结果。 PFGE的局限性 无法判断2006年产KPC酶肺克的小范围流行与2010年出现的15株产KPC酶的肺克A,B,C,三个克隆间有无同源性 不同实验室间的分型结果不能进行比较 多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST 一种基于核酸序列测定的细菌分型方法 通过PCR扩增管家基因内部片段 测定其序列，分析菌株的变异 MLST的原理 一般测定6~10个管家基因内部400~600bp的核苷酸序列，每个位点的序列根据其发现的时间顺序赋予一个等位基因编号，每一株菌的等位基因编号按照指定的顺序排列就是它的等位基因谱 ，也即是这株菌的序列型（sequence type,ST）。这样得到的每个ST均代表一组单独的核苷酸序列信息 。 序列型（ST) 序列型（ Sequence-typying, STs ）等同于MLEE得出的电泳型(Electrophoretic type, ET） 通过比较ST可以发现菌株的相关性,即密切相关菌株具有相同的ST或仅有极个别基因位点不同的ST,而不相关菌株的ST至少有3个或3个以上基因位点不同 MLST的分析方法 MLST技术针对看家基因设计引物对其进行PCR扩增和测序,得出每个菌株各个位点的等位基因数值 然后进行等位基因图谱(allelic profile)或序列类型(sequence types, STs)鉴定 再根据等位基因图谱使用配对差异矩阵(matrix pair-wise differences)等方法构建系统树图进行聚类分析 谢