简答植物组织培养.doc

（一）、某培养基的配方是MS＋BA 1.5 mg/L＋NAA2.5 mg/L＋IBA 1.0 mg/L+ 2.5%蔗糖＋0.7％琼脂粉。MS母液的浓度分别是：大量元素50倍，微量元素100倍，铁盐20倍，有机物100倍；BA母液浓度1.0 mg/ml ，NAA母液浓度0.5mg/ml，IBA母液浓度0.2mg/ml。要配制800ml该培养基，需要吸取各种母液各多少ml？分别称取蔗糖、琼脂粉各多少克？（要求写出计算步骤）1.BA 0.8*1.5/1 1.2ml 2.NAA 0.8*2.5/0.5 4ml 3.IBA 0.8*1/0.2 4ml 4.蔗糖 800*2.5% 20g 5.琼脂粉 800*0.7% 5.6g （二）、如何减轻试管苗玻璃化现象？如何防止外植体的真菌污染？ 1. （1）利用固体培养方法，增加琼脂浓度，降低培养基中的渗透势，造成细胞吸水阻遏。或提高培养基中蔗糖含量或加入渗透剂，减少培养基中植物材料可获得的水分，这也可以抑制玻璃化的发生。?? （2） ? 适当降低培养基中的细胞分裂素和赤霉素的浓度。或者，适当增加培养基中Ca、Mg、Mn、K、P、Fe、Cu、Zn元素含量，降低N和CL元素比例，特别是降低胺态氮的浓度，提高硝态氮量。（3）增加自然光照。 因为自然光中的紫外线能促进试管苗成熟。（4）改善培养器皿的气体交换状态封口膜（5）在培养基中添加其他物质。如添加马铃薯汁可降低油菜的玻璃苗的产生频率。 2.在接种前要求无菌室内做到用空气循环过滤装置使空气过滤灭菌或通过紫外线照射灭菌外，再利用超净工作台接种前，应开机15min以达到空气的充分过滤灭菌。而且接种时严格操作，如在接种前去掉橡皮筋，打开棉塞时动作要轻及去掉瓶塞后瓶子应拿成斜角，最好瓶口放在酒精火焰的前方等等 （三）、简答出一般茎段是怎样选材消毒和接种的？ 选材：较幼嫩的材料，器官的生理状态和发肓年龄，外植体的大小为0.5－1.0cm 消毒：自来水较长时间冲洗+70%酒精浸泡植物种+无菌水冲洗2~3次+2%~10%NaClO（0.1%HgCl2）12min+无菌水冲洗3次。（第三章5页） 接种：①左手拿三角瓶或果酱瓶，用右手轻轻取下封口膜或盖子②将三角瓶或果酱瓶的口靠近酒精灯火焰，瓶口稍微倾斜，这样瓶口外部在火焰上旋转灼烧数秒钟，后用镊子将外植体送入瓶中。 一．植物组织培养成功的关键是什么？ 1.无毒无菌的环境2.生长素或生长素类似物3.通常用固体培养基 琼脂 4.先进行植物组织或器官的脱分化5.长出根来后要保证根呼吸所需氧气污染分为细菌和真菌 外植体的灭菌要彻底 . 要获得完全 无菌的接种材料严格遵守无菌操作规程 加入抗生素 无菌培养 控制外植体的接种数量 一旦发现已经有了污染的苗头，最好马上转接到新的培养基上 2 外植体和愈伤组织的褐化问题 选择适宜的外植体及最佳培养基???对于易褐变的材料注意改善培养条件，并进行连续转接，勤换新鲜培养基。???在培养基中加入抗氧化剂，如抗坏血酸、聚乙烯吡咯烷酮和牛血清白蛋白等。???在培养基中加入吸附剂，如：活性炭。 3 玻璃化的问题 （1）利用固体培养方法，增加琼脂浓度，降低培养基中的渗透势，造成细胞吸水阻遏。或提高培养基中蔗糖含量或加入渗透剂，减少培养基中植物材料可获得的水分，这也可以抑制玻璃化的发生。?? （2） ? 适当降低培养基中的细胞分裂素和赤霉素的浓度。或者，适当增加培养基中Ca、Mg、Mn、K、P、Fe、Cu、Zn元素含量，降低N和CL元素比例，特别是降低胺态氮的浓度，提高硝态氮量。（3）增加自然光照。 因为自然光中的紫外线能促进试管苗成熟。（4）改善培养器皿的气体交换状态封口膜（5）在培养基中添加其他物质。如添加马铃薯汁可降低油菜的玻璃苗的产生频率。 为什么茎尖培养可获得无特定病毒植株？怎样获得无特定病毒的试管苗？获得的无病毒苗用一种方法鉴定其真的无特定病毒的植株？ 1）．感染病毒植株的体内病毒的分布并不均匀，病毒的数量随植株部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域的病毒的感染深度越低，生长点则几乎不含或含病毒很少。?了解植物携带何种病毒，病毒在体内的分布位置2.?母体植株的选择和预处理3.?茎尖的剥离4.?脱毒效果检测 取培养植株的叶片置于研钵中，加入少量的水和等量的0.1mol/L磷酸缓冲液（pH?7.0），磨成匀奖，将其涂抹在指示植株叶片上，在指示植物的叶片撒上金刚砂，通过轻轻摩擦使汁浸入叶片表皮细胞而又不损伤叶片。5分钟后用清水清洗叶面。将指示植株放于防蚜虫网罩的温室内。然后视其病斑的有无，来判断是否脱除了病毒。 选择优良母株幼苗，茎尖的２～３cm小段，冲洗1h左右 表面消毒，（表面消毒剂、无菌水），在双筒解剖镜下剥去幼叶，露出圆滑的生长点，注射器针头或解剖针，