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实验9淀粉酶的纯化分析.doc

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实验九 工业淀粉酶的纯化分析 一.目的 工业淀粉酶是粗酶制品,含有大量的杂质。本试验的目的是学习纯化的方法和步骤,掌握蛋白质(酶)纯化过程的基本概念。 二.步骤 工业淀粉酶 g,加蒸馏水 ml溶解;取 ml,-20℃保存。其余70%饱和度硫酸铵沉淀,离心后 ml溶解,分装后-20℃保存。 取 ml沉淀溶解液上样,saphedex-G25脱盐,收集蛋白部分共 ml,-20℃保存。 取上述保存的样品,分别测定酶的活力和蛋白质的含量。 三.结果计算: 数据、计算过程和结果请填入表格一 其中,回收率是指(相对于初始时)总酶活力剩余的百分数;纯化倍数是指比活力提高的倍数。 四.结果分析(分析该计算结果产生的原因): 纯化的目的是去除杂蛋白,同时尽可能减少目标蛋白的损失(丢失和失活)。所以正确的纯化步骤中,酶的总活力应该会 。但是比活力会 。但是本次实验总活力出现了相反的结果,请分析其中的原因(推测导致这个现象产生的原因)。 提示:可以在图书馆检索有关文献, 样品 项目 粗酶溶液 70%硫酸铵 沉淀溶解液 脱盐后蛋白质 收集液 备注 酶浓度(u/ml) 总活力(u) 活力回收率(%) 100% 蛋白浓度(mg/ml) 总蛋白(mg) 比活力(u/mg) 纯化倍数 1 表一 结果计算

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