5花青素含量测定方法的建立(盲审稿).docVIP

火棘果中原花青素含量测定方法的建立 摘 要：采用香草醛-盐酸法对火棘提取物中原花青素含量进行测定，考察了标准物、光照条件、反应时间、反应温度、盐酸浓度、香草醛浓度等因素对原花青素与香草醛显色反应的影响。结果表明，香草醛-盐酸法测定火棘提取物中原花青素含量的适宜条件为：1mL提取液，6mL 4％香草醛甲醇溶液以及3mL浓盐酸，混匀后不避光条件下30℃水浴保温10min后，以儿茶素为标准品，波长500nm处测定吸光度值。该测定方法具有良好的重复性、稳定性、重现性，回收率较高。 关键词：火棘，原花青素，香草醛盐酸法，含量测定 分类号:TS201.2[著者标引文献标识码：A文章编号：栏目信息：Determination of proanthocyanidins content in Pyracantha fortuneana fruit Abstract: Vanillin-HCl assay was adopted to determine the content of proanthocyanidins in Pyracantha fortuneana extract. Several parameters, such as standard, light, reaction time, reaction temperature, HCl concentration and vanillin concentration that affecting the color reaction of proanthocyanidin were investigated. The results showed the appropriate reaction conditions were as the following, 1mL of pyracantha extract, 6mL of 4g/100mL vanillin solution and 3mL of concentrated HCl in methanol respectively, after blending the reaction was carried out at 30℃ for 10min and then measured the absorbance at 500nm. Assessment of the method by statistics showed the method has good repeatability, stability, reproducibility and high recovery rate. Key words: Pyracantha fortuneana; proanthocyanidins; Vanillin-HCl; assaying 火棘Pyracantha fortuneana）属于蔷薇科苹果亚科（Maloideane），是一种多用途 1 材料与方法 1.1 材料与仪器 火棘提取物 实验室自制；实验用水 均为去离子水；无水乙醇、甲醇、盐酸、香草醛 均为分析纯；(+)-儿茶素标准品、原花青素标准品 购自上海金穗生物科技有限公司。 万分之一电子天平 德国赛多利斯5424R小型台式高速冷冻离心机（Centrifuge 5424R）UV-5800PC扫描型紫外可见分光光度计香草醛甲醇溶液6mL，浓盐酸3mL，摇匀，水浴30℃条件下反应30min后，以甲醇为空白对照，其它步骤同上。考察避光与不避光条件下，在5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60min时火棘提取物与香草醛反应后溶液吸光度的变化。 1.2.4.2 温度对吸光度的影响 取一定浓度的火棘提取物溶液1mL，至10mL试管中，参照1.2.2反应体系，以甲醇为空白对照，其它步骤相同。考察温度各为20、30、40、50℃时对火棘提取物与香草醛反应的吸光度的影响。 1.2.4.3 盐酸体积分数对吸光度的影响 取一定浓度的火棘提取物溶液1mL，至10mL试管中，参照1.2.2反应体系，以甲醇为空白对照，其它步骤相同。考察盐酸体积分数各为20%、40%、60%、80%、100%时火棘提取物与香草醛反应的吸光度的变化情况。 1.2.4.4 香草醛质量浓度对吸光度的影响 取一定浓度的火棘提取物溶液1mL，至10mL试管中，参照1.2.2反应体系，以甲醇为空白对照，其它步骤相同。考察香草醛质量浓度各为0.5、1、2、3、4、5、6g/100mL时对火棘提取物与香草醛反应的吸光度的影响。 1.2.5 测定方法评价 1.2.5.1 火棘提取物溶液标准曲线关系的建立 分别制备质量浓度为2.4、3、4、6、8、10、