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生物学实验技术实操练习总结报告 实验玻璃器皿与常用工具的准备与设备调试 一、玻璃器皿与常用工具：大号镊子、尖头镊子、剪刀、解剖刀柄、解剖刀片、酒精灯、喷雾器、烧杯（50 mL、100 mL、500 mL、1000 mL）、量筒（1000 mL、100 mL、25 mL）、容量瓶(1000 mL、500 mL、100 mL)、试剂瓶（1000 mL、500 mL、100 mL)、载玻片、盖玻片、移液管、玻璃棒、药匙，PH试纸，锥形瓶，称量纸等。 1、玻璃器皿的洗涤：一般玻璃器皿只要保证洁净即可，可用自来水洗净，再用普通蒸馏水冲洗，然后晾干即可。组织培养所用器皿和工具必须无菌，因此除正常洗净外，还须进行高压灭菌。 载玻片、盖玻片的洗涤须用10%的盐酸酒精溶液浸泡后，再用95%酒精洗涤，然后用绸布擦干备用。须注意不可用其他布或纸张擦拭，以免次生污染。擦拭盖玻片要按课堂讲述的要领进行，以免受伤。 2、常用玻璃器皿与常用工具的消毒 培养瓶的灭菌待培养基配制完成进行适当分装然后封口后放入高压灭菌器中灭菌。各种镊子、剪刀、解剖刀柄、解剖刀片以及进行无菌切割等操作的垫纸、培养皿等须用报纸包裹，外面再用耐热和塑料薄膜包裹后放入高压灭菌器中灭菌。 3、高压灭菌器的使用 A检查电路与设备完好。 B打开灭菌锅盖，检查水量，如水量不足则须向锅内加入适量水。 C将待灭菌的物品放入锅内，不要放的太多，以免影响灭菌效果。物品不要近靠锅壁，以免冷凝水顺壁流入物品中。装有液体的容器要注意不能倾斜、倒置。 D加盖旋紧螺旋。四个螺栓应按对角顺序拧紧。 E打开放汽阀，然后打开电源加热，设定工作温度和压力、工作时间，一般设定为温度120℃，消毒20min.自开始产生蒸汽后5 min，此时锅内的冷空气已由排气孔排尽，再关紧放汽阀，让温度随蒸汽压力的增高而上升。 待压力逐渐上升到所需压力时（一般为15磅/时， 1.034×105 Pa）, 灭菌20 min。 F达到灭菌时间后，系统会自动关闭，此时切记不可打开灭菌器，要让系统自行冷却，待压力降至0时，开盖，取出灭菌物品。 G 培养瓶取出后整齐摆放在平坦桌面上冷却，在培养基凝固前不可使其晃动。其他工具与器皿放入超净工作台中备用。 4、超净工作台的消毒与使用 (1)操作者需穿着隔离衣，带好一次性口罩、帽子及医用乳胶手套。将一应需用物品有序地放入超净工作台。包括培养瓶、酒精灯、各种工具、消毒酒精瓶、消毒酒精棉球、废水杯等。 (2) 超净工作台进行表面灭菌：先开启超净工作台上的紫外灯，紫外照射20 min以上。关闭紫外灯，使用前再用75%的酒精或0.5%过氧乙酸喷洒擦拭消毒工作台面，并对操作者手及前臂用棉球进行擦拭消毒。 (3)开启超净工作台工作电源，按照无菌操作规程操作。 (4) 如遇机组发生故障，应立即通知实验动物室，由专业人员检修合格后继续使用。 (5) 实验结束后，用消毒液擦拭工作台面，关闭工作电源，重新开启紫外灯照射15 min 5、电子天平、电炉、光照培养箱、恒温培养箱等的使用与注意事项（略）。 6、旋转切片机的使用 第二部分常用试剂的配制及玻璃器皿的使用 一、常用试剂：硫酸—重铬酸钾清洁液、10%盐酸酒精洗液、30%-95%梯度酒精溶液、二甲苯酒精溶液（1:2、1:1、2:1）、石蜡二甲苯饱和溶液、粘片剂、苏木精染色剂、铁矾媒染剂、1%铵水溶液、45%冰醋酸、1%蕃红水溶液、1%固绿酒精(95%)溶液、加拿大树胶封片剂、卡诺固定液、Ms培养基大量元素、微量元素、有机物溶液、铁盐及植物激素母液、1%升汞消毒剂。 二、各种化学试剂的配制按课程讲解的注意事项进行。 三、培养基的制备1、培养基的主要成分： （1）水 （2）无机成分： 无机大量元素 氮： 铵态氮、硝态氮混合 磷： 磷酸盐 钾： 钾盐 钙、硫、镁 无机微量元素：铁、硼、锰、锌、铜、钼、钴、氯 （3）有机成分： 糖、 维生素、肌醇、氨基酸及有机附加物。 （4）植物生长调节物质： 生长素类：NAA、IAA、IBA、2,4-D 细胞分裂素类 ： BAP, KT，TDz，ZT 其他类： GA3, ABA， PP333 （5）琼脂 2、培养基的制备 MS培养基配方母液及取用量 成分 1升储备液用量(mg) 每升培养基取用量( mL) 20*储备液1（大量元素） NH4NO3 KNO3 CaCl2﹒2H2O MgSO4﹒7H2O KH2PO4 33000 38000 8800 7400 3400 100 200*储备液2（微量元素） KI H3BO3 MnSO