第二章 免疫分析法【参考】.doc

免疫分析法（immunoassay） 免疫学基础 一.抗原（antigen）（Ag） 1.定义: ① 能刺激机体免疫系统，诱导免疫应答（immune response刺激机体产生抗体）,并能与应答产物如抗体或致敏淋巴细胞发生特异反应的物质。 ②意义: 免疫原性（immunogenicity） 诱导免疫应答过程----简单讲：刺激诱导机体产生抗体 免疫反应性（immumomeadtity） 与抗体特异结合反应 特殊——半抗原（hapten） 只具有免疫反应性而不具免疫原性的物质 2.决定因素 异物性 ——抗原通常不是机体自身的物质,但不绝对（如自身免疫疾病） ——异物性来自化学组成、结构上差异,能为淋巴细胞所识别 ——与机体亲缘关系越远,抗原性越强 ——举例：如器官移植 ② 分子大小 ——抗原分子量一般10kD ——分子大小主要影响免疫原性 ——一般蛋白质MW10KD 免疫原性好 但不绝对,胰岛素MW=5734，有免疫原性 ——半抗原,没有免疫原性,多为小分子物质, ——免疫分析主要应用于大分子生物分析 化学结构: ——化学结构要复杂 直链结构 免疫原性差 支链结构 免疫原性强 环状链结构 免疫原性强 ——举例： 蛋白质 免疫原性 强 多糖 免疫原性 次 核酸 免疫原性 次 3.抗原决定簇（antigenic determinant） 表位（epitope） —7个氨基酸,不超过20个, ——尺度：3×1.5×0.7 nm ——表位特殊性取决于数个氨基酸序列和空间结构 数量 ——一个抗原分子,可有多个表位 “抗原结合价”概念 ——一般表位数目与抗原分子量正相关 MW 42 kD——5表位, MW 700 kD——40表位 种类: ——按化学性质:蛋白.多糖.核酸 ——按亲缘相关: 异种抗原：如细菌、微生物、动物之间 同种异形抗原：如不同人之间 自身抗原：个人体内 共同表位与交叉反应 单纯抗原:一个抗原内有一种表位 共同表位——共同抗原——交叉反应 表位是： ——抗原分子中特征结合点位 ——抗原在免疫应答和反应中与受体和抗体接触结合部分 ——表位是抗原中决定免疫应答和反应特征性的部分 ——抗原的特征体现于表位的特征性=数个氨基酸的序列和结构 4.半抗原 无免疫原性,有免疫反应性,单独半抗原,多为小分子物质 无免疫原性的解决方法： 大分子载体与半抗原结合，形成半抗原-载体复合物，半抗原成为大分子上新的表位,诱导免疫反应,产生抗半抗原抗体。 例: NH2ph NH2phCOOH NH2phSO2H 兴奋剂生物芯片检测 二.免疫应答过程 （抗体从何而来）三.抗体（Antibody Ab） 1.定义: 抗体是机体在免疫应答过程中产生的免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig ） 2.性质: Ig由浆细胞产生,存在于血液（血浆蛋白20%） 体液 ，B细胞膜表面 Ig有多种类型 多数Ig有抗体活性,特异结合对应抗原 ——抗体是免疫球蛋白！ ——免疫球蛋白是抗体？ 3.抗体基本结构 抗体 Y型结构 4条肽链, 二硫键连接 轻链（L）H） 220 AAs 440 AAs 23 kD 50-70 kD ——一个抗体,结合两个抗原 ——MW 15万—20万 ——水解片段 抗体 木瓜蛋白酶：Fab Fc片段 胃蛋白酶： F(ab)2片段 Fab F（ab）2 4.抗体种类 ——哺乳动物抗体约106种. ——按重链C区不同分5类,IgA,IgG,IgD,IgE,IgM, ——血清中IgG含量最高，约80%--75% 5.抗体生产 抗血清制备 利用抗原,免疫动物取得抗血清,经纯化, 得多克隆抗体（polyclonal）——针对不同抗原，同抗原不同表位 单克隆抗体制备（monoclonal antibody）McAb ——1975年Kohler 和Milstein 报道 1984年诺贝尔医学奖 ——简单过程： 抗原免疫动物，得到多种脾B 细胞；与骨髓瘤细胞融合杂交瘤细胞；单个细胞培养,一个无性繁殖的细胞无限繁殖