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微免实验考试整理 红色：填空 黄色：重点 （一） 实验一 步骤： 1、洗手 消毒 ? ?扎手指（一针见血） 2、一滴抗凝剂 ? 双凹片 ? 1滴血，用针混匀 3、点酒精灯 ?接种环烧3次 ?取3～4环菌液 ? ?加入血中用接种环混匀 ?温育（37度）30分钟 推片（慢、厚）?? 自然干燥 4、加瑞氏染液2滴20秒 ?加缓冲液4滴（染液与缓冲液比为1:2） ?混匀 ? ? 染色10分钟 ?冲洗 ? ? 吸干 ? ?油镜观察 示教片： 大吞噬现象要认识“巨噬细胞” ? ? ? ? ? ? ? ? ? 小吞噬现象主要认识“中性粒细胞”（马蹄状形） ??淋巴细胞转化试验转化百分率正常值为70%左右 分裂相：即染色体型 母细胞：大4-5倍；核质疏松，有1-3个核仁；核周透明区；胞浆有空泡 过渡型：略大；核质略疏松；着色较淡 小淋巴细胞：核质致密；着色深；胞浆少 E玫瑰花环实验（） 实验、基础： ? 抗原决定簇——抗体的互补决定区 、特点： ? 特异性、可逆性、?比例性、阶段性 、抗原抗体反应因素： ? 电解质、温度、酸碱度 凝集反应、沉淀反应、免疫标记技术I 凝集反应：（）概念：抗原 + 抗体 = 凝集团块 直接凝集：颗粒性抗原 + 抗体 = 凝集团块?玻片、试管间接凝集：可溶性抗原包被于载体 + 抗体 = 凝集团块反向间接凝集：抗体包被于载体 + 抗原 ?= 凝集团块 协同凝集：抗体结合金葡菌SPA + 抗原 = 凝集团块 II 沉淀反应：（） 概念：可溶性抗原 + 抗体 = 沉淀物 单向琼脂扩散单向琼脂扩散Ig和补体成分的含量 ② 双向琼脂扩散用于分析鉴定标本中多种抗原成分（抗原、抗体同时扩散自由、定向） 对流免疫电泳在相应抗原抗体孔之间可见白色沉淀线。 ④火箭电泳：抗原定量试验（抗体琼脂板、抗原扩散（自由、定向） III 直接凝集反应—拨片凝集 ?（三）实验三 补体结合实验中和反应实验：（病毒中和实验、毒素中和实验） 略 免疫标记技术概念： ? 将已知抗体标记上显示性物质，通过检测标记物，反映有无抗原抗体反应，从而间接测出微量的抗原或抗体。 常用的标记物有： 酶、荧光素、放射性同位素、胶体金、生物素、电子致密物等。 E L I S A（酶联免疫吸附试验） 原理： ? 把抗原抗体的免疫反应和酶（主要有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）的高效催化作用有机地结合起来，并仍保持其免疫和酶的活性。结合在抗原抗体复合物上的酶在遇到相应的底物时，可以催化底物水解、氧化或还原，从而产生有色的物质。颜色反应的深浅与抗体或抗原的量成正比。 方法： ?主要有间接法（用于测抗体）和双抗体夹心法（用于测抗原）。实验： （四）实验四 革兰染色意义：对细菌鉴别、选择抗菌药物、研究细菌致病性等有重要意义。 原理：与细菌细胞壁有关，尚未完全阐明。 阴性—红色? ?阳性—蓝色 细菌学总论 细菌是一类具有细胞壁的单细胞微生物，形体微小，一般以微米（μm）作为测量单位。 细菌按其外型可分为球菌、杆菌、螺型菌三大类。 不同种类的细菌大小不一，大多数球菌直径约1μm，杆菌长25μm，宽0.31μm。 细菌的特殊结构：荚膜、鞭毛、芽孢、菌毛 细菌生长（1）液体培养基 ?沉淀生长、混浊生长、表面生长 （2）半固体培养基（0.1%~0.3%琼脂粉） ?混浊生长、线状生长 （3）固体培养基（1.4%~2%琼脂粉） ?菌落、菌苔 细菌变异 一、菌落变异（SR变异） ???? S型菌落(Smooth)光滑菌落 — 表面光滑有光泽，边缘整齐。 ???? R型菌落 (Rough) 粗糙菌落 — 表面粗糙而暗淡，边缘不整齐。 ???? 菌落变异是由于菌体本身起变化。一般光滑的细菌有毒力；粗糙的细菌没有毒力或毒力减退。 二、鞭毛变异（HO变异） 细菌的鞭毛在某些情况下可以消失而变成没有鞭毛的细菌。 ? 细菌色素 细菌生化反应 消毒灭菌器材（看书） 细菌的划线分离和药敏实验 药敏实验结果判断：用精确度为1mm的游标卡尺量取抑菌圈直径。根据NCCLS标准，作出“敏感”、“耐药”和“中介”的判断。 药敏实验意义： ① 可预测抗菌药物治疗的效果， “敏感”治疗可能有 效；“耐药” 可能失败； ② 指导临床医生合理选择抗生素，AST的结果为“耐 药”，则应更换药物； ③ 提供所选择药物的依据； ④ 监测耐药性，分析耐药菌变迁，掌握耐药菌感染 病流行病学，控制和预防耐药菌感染发生和流行 （五）实验五化脓性球菌：葡萄球菌（左上）、链球菌（右上）、肺炎球菌（左下）、淋球菌（右下） 甲型（α）乙型（β）丙型（γ）溶血链球菌、肺炎链球菌、淋病奈瑟菌 2、 白喉杆菌（亚碲酸钾血琼脂Albert染色—异