免疫学实验指导【参考】.docVIP

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免疫学实验指导 生命科学与工程学院生物工程、生物技术、动物医学专业用 冯玉萍 [分组]:4人/组 ,实验用动物、器材以每组需要量设计 [班级] 2006生物工程 、生物技术 [学生人数]:65人/58人 。 分16组/15组 [时间] 2008年3月—2008年7月 两周一次4学时。 目 录 实验一、免疫学实验动物的一般操作 实验二、实验动物免疫器官、免疫细胞观察 实验三、实验动物的采血方法、动物血清及红细胞的制备方法 实验四、淋巴细胞分离与E玫瑰花环形成试验 实验五、IgG的分离和纯化 实验六、玻片凝集试验(ABO血型鉴定) 实验七、环状沉淀试验 实验八、琼脂扩散试验(单向) 实验九、巨噬细胞吞噬功能试验 实验十、白细胞吞噬试验 实验一、免疫学实验动物的一般操作 [实验原理] 实验动物的基本操作是免疫学实验的基础,抗原对动物机体的免疫效果,通过实验动物进行验证,因此必须掌握实验动物的一般操作技术。 [目的要求] 实验材料的准备(棉球、注射器的准备与消毒)(演示) 了解免疫学实验常用动物的生物学特性、用途及其健康要求。[自学] 学习实验动物的编号、抓取、固定和几种不同的注射途径方法。 练习对小白鼠给药的几种不同途径的注射方法。 练习小白鼠的取血方法。 6、学习血涂片的制作及染色;观察动物血液中有形成分的形态结构特点。 [实验动物] 小白鼠,2只/组,共需18 ~ 20只。 [试剂] ⑴ 3%来苏儿或3%石炭酸 100~150 ml/组; ⑵ 无菌生理盐水100~150ml/组;磷酸盐缓冲液20~50ml/组(带滴管、染色用)。 ⑶ 3 ~ 5% 苦味酸20~50ml/组(带滴管,编号用); ⑷ 5%品红20ml~50ml/组(带滴管,编号用); ⑸ 瑞特氏(wright‘s)染色液50ml/组(带滴管,染色用); *抗凝剂一支 [器材] ⑴ 1ml注射器及针头2支/组; ⑵ 碘酒棉球、酒精棉球、无菌干棉球各适量; ⑶ 手术剪刀2把/组;镊子2把/组;载玻片、盖玻片各6片/组; ⑷ 毛细吸管2支、50—100ml烧杯1个/组 ⑸ 显微镜6台/组 [6] 鼠笼1个/组 [操作步骤] 1、练习小白鼠抓取、编号、皮下注射、皮内注射、腹腔注射的方法。(见《免疫学实验》P9-13。 2、练习小白鼠尾静脉取血法。(P15) 实验报告要求: 1、时间、地点、操作人、同组人、指导老师。 2、实验原理、目的要求 3、实验操作记录(实验步骤、结果) 4、分析总结:依据实验原理、目的要求,分析总结实验是否成功,是否达到实验目的?为什么? 5、对实验动物编号有何实际意义,你对书中关于小白鼠的编号方法有何想法?有无更简便、实用的方法? 6、若给动物注射传染性材料应注意些什么? 实验二、免疫器官与免疫细胞观察 [实验原理] 免疫器官、免疫细胞是动物免疫系统的主体。在胸腺、脾脏中有大量淋巴细胞存在,在外周血液中有大量淋巴细胞和白细胞等免疫细胞存在,发挥着免疫监视作用。 [目的要求] 1、练习血涂片的制作 2、学习小鼠颈椎脱臼致死的方法,观察小白鼠的解剖结构; 3、学习脾脏、胸腺的触片制备与染色方法;观察小鼠脾脏触片、血液涂片中的免疫细胞,并画图。 [方法与步骤] 1、练习血涂片的制作(3张/组) 1)准备一张洁净玻片,取血1滴于玻片右侧,另取一光边玻片的一端,放在血滴前方,并逐渐后移接触血滴,血液立即沿推片散开,然后将推片与载片保持30一45度角,平稳地向前推动,至玻片另一端,载玻片上便留下一层血膜。良好的血膜象舌头,头、体、尾鲜明,厚薄适宜、分布均匀,边缘整齐,两侧留有空隙。 2)染色: A、瑞特氏(WrightFs)染色法: ①.血涂片制成后可在空气中挥动,使迅速干燥,以免血细胞皱缩。选择良好的血片,用特种玻璃铅笔画出两边界限(注意保留尾部,因体积大的细胞往往在此出现),以防染液外溢。 ②在血膜上滴加几滴瑞氏染色液,左右晃动,使染液完全覆盖血膜,注意染液不宜过多而溢出界限,亦不能过少而干燥。 ③1—2min后,滴加等量磷酸盐缓冲液或生理盐水,2—3min后,可见表面有金属光泽,即可用清水轻轻冲去染液,待血片自然干燥或用滤纸轻轻吸干。在正常的情况下,血膜外观染成粉红色。 3)镜检:先在低倍镜下检查血片,染色是否合格,血细胞分布是否均匀等,然后换高倍镜或油镜观察,并绘图,指出淋巴细胞与白细胞、红细胞。如自己图片不成功,则对教学片进行观察和绘图。 结果: 血液涂片瑞特氏染色法染色的结果: 中性粒细胞:是白细胞中数量最多的细胞,胞体大于红细胞,细胞核蓝紫色,呈分叶形,可分2—5叶。叶间有细丝相连;细胞浆为粉红色,其中充满褐灰色的小颗

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