免疫调节细胞（Treg 细胞）对成人乙型肝炎病毒疫苗接种.docVIP

免疫调节细胞（Treg 细胞）对成人乙型肝炎病毒疫苗接种免疫应答的影响李金成1，2 谭德明1 李科成3 中南大学湘雅医院感染科 2.邵阳医学高等专科学校内科学教研室 3.珠海市妇幼保健院检验科）摘要目的 通过对乙型肝炎病毒疫苗接种后不同免疫应答人群T调节细胞、Foxp3 mRNA的表达和细胞因子分泌的检测，探讨乙型肝炎病毒疫苗接种后免疫应答与免疫调节细胞和细胞因子之间的内在联系。方法 采集不同反应人群全血，实时荧光定量 PCR检测人外周血单个核细胞Foxp3 mRNA的表达；流式细胞术对外周血单核细胞的表面标志物CD4、CD25进行检测；酶联免疫吸附实验检测外周血单个核细胞PHA和HBsAg刺激后IL-4、IL-12、IL-18、IFN–γ的产生水平。结果（1）PHA和HBsAg刺激前后，Foxp3的表达在应答组和无应答组、对照组之间的差异有显著性意义（p 0.05），其中无应答组Foxp3的表达最高。（2）应答组外周血CD4+CD25+Treg细胞占CD4+T细胞的百分比明显低于对照组，差异有统计学意义(F=2.990 P 0.01)。（3）各组外周血单个核细胞经PHA和HBsAg刺激后，无应答组的IFN-γ浓度明显低于应答组，差异有统计学意义（p0.01）。(4)各组外周血单个核细胞经PHA和HBsAg刺激后，IL-18、 IL-4 、IL-12的浓度差异均无统计学意义。结论CD4+CD25+ Foxp3+Treg细胞在一定程度上参与了乙肝疫苗接种应答的负性调控；乙型肝炎病毒疫苗接种后无应答与IFN-γ分泌不足有关；抗-HBs滴度水平与IFN-γ和CD4+CD25+ Foxp3表达无相关性。关键词 乙型肝炎病毒疫苗，无应答，CD4+CD25+， Foxp3 ， Treg细胞 乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）疫苗是预防乙型病毒性肝炎感染的主要方法，但按标准方案一个免疫程序后，仍有一定比例的接种者乙型肝炎病毒表面抗体（hepatitis B surface antibody, HBsAb, 抗- HBs）不产生或滴度不能达到保护水平(抗- HBs10mIU/mL)，即无、弱应答者，成为HBV的易感者[1]。在健 湖南省科技厅项目（2007FJ3092），湖南省教育厅项目（07C065），湖南省卫生厅项目（B2007194） 李金成，男，博士研究生，教授，主任医师，主攻方向：病毒性肝炎和慢性肝病研究。 康人群中该比例波动在5%～10%之间[2，3]。原因和机制目前尚不十分清楚。影响HBV疫苗接种无应答的因素众多，包括疫苗接种的剂量，接种程序以及被接种者的年龄、遗传个体差异和免疫应答能力等。宿主免疫应答能力可能在HBV疫苗接种的应答中起关键性作用。有研究表明抑制性T淋巴细胞（TS）的抑制作用，抗原特异性Th细胞数量不足或功能缺陷，抗原提呈功能缺陷 ，协同信号分子表达不足等均有可能导致HBV疫苗接种无应答。最近有研究指出在HBV疫苗接种无应答者中，CD4+ CD25+T细胞的含量和Foxp3 mRNA表达有短暂的提高[4，5]。为了证明CD4+CD25+Foxp3+ Treg细胞在HBV疫苗接种无应答者中的作用，我们研究了接种HBV疫苗后人群外周血单核细胞中的CD4+CD25+Foxp3+ Treg细胞以及某些细胞因子，探讨其免疫机制。 1．材料与方法 11 主要试剂和材料 淋巴细胞分离液购自AX IS- SH IELD 公司， PHA购自Sigma 公司产品，HBsAg购自美国ARP 公司， Trizol裂解液购自Invitrogen公司，PrimeScriptTM RT Enzyme Mix、Premix ExTaqTM购自Promega公司；oligo(dT)15、RNAase抑制剂购自大连宝生物公司；引物购自上海Invitrogen公司，SYBR? Premix ExTaq试剂盒购自Takara公司, anti-human CD4-PE、anti-human CD25 FITC购自Biolegend公司， BD Pharm LyseTM裂解缓冲液购自BD公司， IFN-γ、IL -4、IL-12、IL-18 Elisa检测试剂盒购自 RND公司， 12 研究对象 对某医专2006级大专生1024人进行HBV血清学初筛，对血清中无任何标志物者（405人），在取得知情同意后，重组酵母乙肝疫苗（大连汉信生物制药有限公司，批号：200611013），上臂三角肌注射, 每次20μg ,按0、1、6 个月程序接种。全程接种完成后1个月进行乙肝病毒血清学检查，383人检出抗-HBs阳性，22人抗-HBs阴性。选取22例抗-HBs阴性者（无应答组），男5例，女13例，平均年龄（19.68(0