高中生物2.1微生物的实验室培养第一课时解决方案.ppt

是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而 达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本的含 水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越 大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓 慢。 干热灭菌 实验原理 高压蒸汽灭菌 是将待灭菌的物品放在一个密闭的高压蒸汽灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气,从而使温度高于100℃，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 高压蒸汽灭菌，在加压到100kPa之前，要彻底排出锅内的冷空气，原因？ 为了使高压锅能够在很短的时间内达到较高的温度，使锅内充满水蒸气，并使水蒸气分子运动达到尽可能快的速度，穿透各种微生物菌体及芽孢等。 紫外线灭菌 是用紫外线灯进行杀菌。紫外线杀菌机制主要 是它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和DNA链的交联， 从而抑制了DNA的复制。波长为200-300nm的紫外线 都有杀菌能力，其中以260nm的杀菌力最强。 实验原理 实验室常用灭菌方法的比较 灭菌 方法 适用对象 所需条件 灭菌时间 灼烧 灭菌 接种的金属工具(如接种针、接种环)、试管口或瓶口 在酒精灯的火焰外焰灼烧 直至烧红 干热 灭菌 耐高温、需干燥的物品(如玻璃器皿、金属用具) 干热灭菌箱内160～170 ℃ 1～2 h 高压 蒸汽 灭菌 培养基 100 kPa；121 ℃ 15～30 min 1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 ⑴培养细菌用的培养基与培养皿 ⑵玻棒、试管、烧瓶和吸管 ⑶实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。 P15——16旁栏思考 培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶，所采用的灭菌、消毒方法依次是（ ） ①化学消毒 ②灼烧灭菌 ③干热灭菌 ④紫外线灭菌 ⑤高压蒸汽灭菌 ⑥巴氏消毒法 A.⑤③②①④⑥ B.①②③④⑤⑥ C.⑥②③④①⑤ D.③④②①⑥⑤ A 使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境。 二.实验操作(以大肠杆菌的纯化培养为例) ㈠.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.计算 2.称量：牛肉膏比较粘稠（称量纸）；动作迅速。 3.溶化：在此过程中，不断用玻棒搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂 4.灭菌: 5.倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。 培养基：高压蒸汽灭菌 培养皿：干热灭菌 倒平板操作 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 问题讨论 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 * * 微生物最常利用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；微生物所需要的化合物中，需要量最大的是碳源，新陈代谢同化类型的划分也是根据是否能合成含碳有机物为依据，能合成含碳有机物的为自养型，反之为异养型。培养自养型微生物需要提供的是无机碳源；培养异养型微生物需要提供的是有机碳源。 * 微生物最常利用的氮源为铵盐、硝酸盐。对异养微生物而言，含CHON的化合物既是氮源有是碳源。 生物固氮：固氮微生物将大气中的氮气还原成氨的过程（异养型生物）。 微生物之所以需要补充生长因子，往往是由于缺乏合成这些物质所需要的酶或者合成能力有限。 * 微生物最常利用的氮源为铵盐、硝酸盐。对异养微生物而言，含CHON的化合物既是氮源有是碳源。 生物固氮：固氮微生物将大气中的氮气还原成氨的过程（异养型生物）。 微生物之所以需要补充生长因子，往往是由于缺乏合成这些物质所需要的酶或者合成能力有限。 不同微生物对营养物质的需求不同，因此应根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。 培养基中各种营养物质浓度比直接影响微生物的生长繁殖以及代谢产物的形成和积累，其中碳氮比的影响较大。 病毒不能利用人工培养基来培养，需要接种在动植物组织中才能增殖。常用于培养病毒的是活鸡胚。 * * 青