碱性磷酸酶的活力测定(修改版)重点分析.ppt

3、铁氰化钾的硼酸溶液 称取铁氰化钾2.5g，硼酸17g，各自溶于蒸馏水400ml中，两液混合后，加蒸馏水至1L，置棕色瓶中避光保存(如出现蓝绿色即弃去)。 4、酚标准工作液（0. 05mg/ml）：购买合格的二级标准品。 4一氨基安替比林用量与吸光度成正相关，需准确加入。铁氰化钾用量不足时，反应不完全，测量结果偏低，因此铁氰化钾用量必须加足或稍稍过量 本实验采用终止法；终止剂是 铁氰化钾硼酸液；硼酸改变了PH，使其不再处于最适PH。 肆 实验操作 · 立即混匀。用510nm波长（红色醌物质的最大吸收波长）比色，以蒸馏水调零点，读取各管吸光度。 保持反应时温度是均衡的，37°C 取试管4支，按下表操作 实验过程两次水浴保温，一次5min，一次15min。前者是达到最适温度，后者是反应时间 ADD YOUR TITLE HERE 1 2 单击此处编辑您要的内容，建议您在展示时采用微软雅黑字体，本模版所有图形线条及其相应素材均可自由编辑、改色、替换。更多使用说明和作品请详阅模版最末的使用手册。 单击编辑标题 单击此处可编辑内容，根据您的需要自由拉伸文本框大小 单击此处可编辑内容，根据您的需要自由拉伸文本框大小 【注意事项】 1、 铁氰化钾溶液中加入硼酸有稳定最后所显色的作用。此液应避光保存，如出现蓝绿色即作废。 2、底物液中不应含有酚，如含有酚时空白管显红色，说明磷酸苯二钠已开始分解，不宜继续使用。 3、加入铁氰化钾后必须迅速混匀(为了改变PH来终止酶促反应）否则对实验结果有影响，偏大。 4、一般血清标本可以共用对照管，黄疸血清及溶血血清应分别作对照管 5、目前市售的酚标准液多数为安瓿瓶，开后不能久置 计算 ALP活性=（A测定—A对照）/（A标准—A空白）*0.05*100(金氏单位） 金氏单位定义 每100ml血清在37℃与底物作用15分钟，产生1mg酚为1个金氏单位。 参考值 成人：3~13金氏单位 儿童：5~28金氏单位 临床意义： 血清中ALP活力测定在临床常作为肝胆疾病和骨骼疾病的临床辅助诊断指标。 1．血清ALP活性升高可能原因如下 ：①肝胆疾病：阻塞性黄疸、急性或慢性黄疸性肝炎、肝癌等；②骨骼疾病：由于骨的损伤或疾病使成骨细胞内所含高浓度的ALP释放进入血液中，引起血清ALP活性增高，如纤维性骨炎、成骨不全症、佝偻病、骨软化病、骨转移癌和骨折修复愈合期等。 2．血清ALP活性降低比较少见： 主要见于呆小病、重症慢性肾炎、乳糜泻、贫血、恶病质等。另有一种遗传性低ALP症，因成骨细胞中缺乏ALP，引起骨中的矿物质严重缺乏，易发生骨折。 标准曲线法 加入物（ml) 0 1 2 3 4 5 酚标准应用液1ml=0.1mg 0 0.05 0.1 0.2 0.3 0.4 蒸馏水 3.1 3.05 3.0 2.9 2.8 2.7 碳酸盐缓冲液 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 0.5%铁氰化钾溶液 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 相当于金氏单位 0 0.5 10 20 30 40 磷酸对硝基酚连续监测法 以磷酸对硝基酚为底物，2-氨基-2-甲基-l-丙醇或二乙醇胺为磷酸酰基的受体。在碱性环境下，ALP催化无色磷酸对硝基酚水解产生游离的对硝基酚，对硝基酚在碱性溶液中转变成黄色。根据405nm处吸光度增高速率来计算ALP活性单位，反应需要Mg2+作为激活剂。 立即混匀，选择波长510nm，用零号管调零，读取各管吸光度，然后将以上各管所得读数与其相应的碱性磷酸酶单位(依次为0 .5、10、20、30、40单位)在坐标纸上作图，绘制成标准曲线。 。 磷酸苯二钠比色法水解速度快，故保温时间较短。该法灵敏度较高，显色稳定，不需去蛋白，操作简单、快速。但与磷酸对硝基酚连续监测法相比，准确度、精密度较低，操作比较繁琐，灵敏度低；酶单位不是国际单位；受胆红素和溶血的干扰。但是若用磷酸对硝基酚法测定，在反应过程中会生成有毒的对硝基苯酚，对皮肤和黏膜有很大的伤害。 实验小结 ——the end THANK YOU 第一组全体成员 血清碱性磷酸酶活性测定 （磷酸苯二钠法） 问题1： 为何要测定血清中酶的活性？有什么意义？ 酶活性测定是目前临床酶学分析最为常用的方法。酶测定约占目前临床生化总工作量的1/4到1/2。 用于诊断的酶类已超过100多种，常用的数十种。 引言（1） 血浆酶 血浆特异酶 非血浆特异酶 外分泌酶 细胞内酶 血浆酶的来源 （一）血浆特异酶 　　在血浆中发挥特定催化作用的酶。如凝血酶、胆碱酯酶（CHE）、脂蛋白脂肪酶、铜氧化酶等。 　　它们大多数在肝内合成，在血浆中的浓度甚至超过器官细胞内