青霉素的生产.ppt

项目三 青霉素的生产 班级:生物制药1311 组别：第2组 组员：张婉月 臧赢 严梦迎 徐洁 陈孝颜 青霉素的介绍 青霉素的生产步骤 青霉素接种、菌种活化、扩大培养 青霉菌发酵 发酵液质量控制? 青霉菌发酵产物初步分离 青霉素发酵液效价的测定 青霉素的概述 青霉素（Benzylpenicillin / Penicillin）又被称为青霉素G、peillin G、 盘尼西林、配尼西林、青霉素钠、苄青霉素钠、青霉素钾、苄青霉素钾。青霉素是抗菌素的一种，是指从青霉菌培养液中提制的分子中含有青霉烷、能破坏细菌的细胞壁并在细菌细胞的繁殖期起杀菌作用的一类抗生素，是第一种能够治疗人类疾病的抗生素。青霉素类抗生素是β-内酰胺类中一大类抗生素的总称。 青霉素的结构式 青霉素分类及分子结构 按其特点可分为 ： 青霉素G类：如青霉素G钾、青霉素G钠、长效西林`青霉素G、peillin G、 盘尼西林、配尼西林、青霉素钠、苄青霉素钠、青霉素钾、苄青霉素钾等。 青霉素V类：（别名：苯氧甲基青霉素、6-苯氧乙酰胺基青霉烷酸） 如青霉素V钾等（包括有多种剂型）。 耐酶青霉素：如苯唑青霉素（新青Ⅱ号）、氯唑青霉素等。 氨苄西林类：如氨苄西林、阿莫西林等。 抗假单胞菌青霉素：如羧苄西林、哌拉西林、替卡西林等。 美西林及其酯匹西林：如美西林及其酯匹美西林等，其特点为较耐酶，对某些阴性杆菌（如大肠、克雷伯氏和沙门氏菌）有效，但对绿脓杆菌效差。 甲氧西林类：如坦莫西林等 青霉素的生产步骤 生产青霉素需经以下步骤： 配料、发酵、过滤、提取、结晶、干燥、包装。 青霉素的发酵工艺过程 一、菌种：保养在低温的冷冻安瓿管中丝状青霉菌菌种 二：所用培养基：LB培养基 配方：牛肉膏1g、蛋白胨2g、Nacl1g、琼脂3g、葡萄糖4g、配成200mL 青霉素接种、菌种活化、扩大培养 一、接种（在超净台上完成） 将灭好菌的LB培养基放入超净台中 将LB培养基倒入试管中，试管摆斜面冷却凝固。 等培养基凝固后，用接种环从安瓿中接去菌种，并在培养基上画S型曲线接种 二、菌种活化 待接种好的菌吸附在培养基上，置于25℃恒温箱中培养5天。 发酵液质量控制? 生产上按规定时间从发酵罐中取样 , 用显微镜观察菌丝形态变化来控制发酵。生产上惯称“ 镜检 ”,根据“ 镜检 ”中菌丝形变化和代谢变化的其他指标调节发酵温度, 通过追加糖或补加前体等各种措施来延长发酵时间, 以获得最多青霉素。 当菌丝中空泡扩大、增多及延伸, 并出现个别自溶细胞, 这表示菌丝趋向衰老, 青霉素分泌逐渐停止, 菌丝形态上即将进入自溶期, 在此时期由于茵丝自溶, 游离氨释放, pH 值上升, 导致青霉素产量下降, 使色素、溶解和胶状杂质增多, 并使发酵液变蒙古稠, 增加下一步提纯时过滤的困难。因此, 生产上根据“镜检 ”判断, 在自溶期即将来临之际, 迅速停止发酵, 立刻放罐, 将发酵液迅速送往提炼工段。 青霉菌发酵产物初步分离 青霉素发酵液效价的测定 根据发酵时间用1% pH 6.0的磷酸缓冲液将发酵液适当稀释.每个被测样品用3套平皿进行测定.青霉素标准液(1单位/ml)与待测样品的稀释液间隔的加入小管内.37℃培养18-24h后,量取抑菌圈直径的大小。 测定步骤 （1）青霉素发酵：用摇瓶或台式发酵罐法接种与培养产黄青霉（青霉素高产分泌菌株） （2）稀释发酵液：作青霉素测定的发酵液用1%pH6.0磷酸盐缓冲液作适当稀释，每个被检验样品用3套培养皿测定其效价。 （3）放牛津小杯:每套含菌测定平半上均匀地放置4支牛津小杯，小杯中心坐落在培养皿两互相垂直直径的各自半径的中心。 测定步骤 （4）杯中加样品液：青霉素标准液（1U/ml）与发酵液的稀释液间隔地加入牛津小贝中，加液量务求准确，以降低操作误差。 （5）培养与测定：加完样品的平板放37℃下培养18～24h后，测量抑菌圈的直径并记录在下表中。 青霉素发酵液效价的计算 （1）求校正值：将青霉素标准测定也（1U/ml）在8套培养皿中抑菌圈的平均值曲线上1U/ml抑菌圈直径相互比较，以求得其校正值。 （2）校正发酵液的值：将此校正值校正被检发酵液抑菌圈直径，以求得他的近似效价值。 （3）查对标准曲线值：将此校正值在标准曲线上查得被检青霉素发酵液（稀释液）的效价单位。 （4）发酵原液的效价：将上述效价值乘上其稀释倍数，就可求得青霉素发酵液原液的效价值。 结果记录 * 三，扩大培养 1、液体试管培养 液体培养基配方：可溶性淀粉9g、 蛋白胨1.2g 、 玉米浆2ml、葡萄糖3g、 K2HPO40.15g 、 MgSO4·7H2O 0.15g、 NaCl0.15g、 蒸馏水300ml。 . 灭菌后，