高锐--铁线莲的组织培养(修改).doc

兰州交通大学化学与生物工程学院 细胞工程课程报告 题目：铁线莲组织培养的研究进展 作者：高锐 学号：201207724 指导教师：谢放 完成日期：2014-12-3 铁线莲组织培养的研究进展 高锐 201207724 摘要：本文简单介绍了铁线莲的特性、应用与价值，以及植物组织培养的定义。从外植体的选择与处理，培养基的选择，生长与分化情况以及组织培养中存在的问题这四个方面介绍了铁线莲组织培养的研究进展。最后对铁线莲的发展及应用前景做出评价及展望。 关键词：铁线莲 组织培养 外植体 愈伤组织 1 引言 铁线莲为毛茛科、铁线莲属植物，多数为落叶或常绿草质藤本，花期从早春到晚秋（也有少数冬天开花的品种），果期夏季，有若干个种、变种及其品种和杂交种，可栽培供园林观赏用，具有很强的观赏性[1]。铁线莲作用广泛，铁线莲可作展览用切花，可用于攀缘常绿或落叶乔灌木上，也是优良的垂直绿化材料和地被植物，也广泛用于盆栽、切花等，但目前在我国园林中应用尚少；以根及全草入药，具有利尿、理气通便及活血止痛的作用，可用于小便不利，腹胀，便闭；外用可治关节肿痛，虫蛇咬伤[2]。 植物的组织培养是根据植物细胞具有全能性这个理论，近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术。广义是指从植物体分离出符合需要的组织。器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。狭义是指组培指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物[3]。 铁线莲的观赏价值及药用价值使它具有极大的应用前景，然而其种子繁殖却较为困难，因此常采用组织培养来繁殖。 2 外植体的选择与处理 2.1 外植体的选择 通过近几年的试验，分别采用了铁线莲的叶片、花、顶芽及茎等作为外植体进行接种培养，筛选出适宜的外植体为未木质化的茎段。采样时间宜选在3-5月份铁线莲生长旺盛时期，否则铁线莲很快木质化不利于愈伤组织的诱导[4]。此外，外植体的处理也非常重要，试验前后分别采用了从自然环境下采取的嫩枝和放到室内弱光处理7-10d新抽出的嫩枝作为外植体，结果表明，经过室内弱光处理新抽出的嫩枝生长比直接从自然条件下采回的嫩枝更容易诱导出愈伤组织。自然条件下处理的外植体需要30d左右才能诱导出愈伤组织，而经过处理的嫩枝2周就能诱导出愈伤组织[5]。 2.2 外植体的消毒 选好的嫩枝在自来水下清洗干净后，用70%-75%的酒精浸泡处理5s，再用0.1%的升汞消毒处理8min，无菌水冲洗干净后将枝条切成1cm左右的茎段接种于培养基中[6]。 3 培养基的选择 3.1 选择依据 不同培养基所诱导出的愈伤组织是明显不同的。低浓度下2，4-D、6-BA及IAA三者同时使用的培养基，愈伤组织在茎段顶端诱导出，呈绿色致密的形态，不利于下一步的分化培养[7]。 2，4-D在1.0-3.0mg/l的浓度范围内单独使用时，愈伤组织在茎段的中部形成，呈白色膨松的形态。随2，4-D浓度的增大，愈伤组织诱导率越高，能达到80%左右，但浓度越大，愈伤组织也越膨松，也不利于愈伤组织诱导[8]。因此，单独使用2，4-D时，不仅要考虑愈伤组织的诱导率，还要考虑愈伤组织的松紧度。 6-BA在1.0-3.0mg/l的浓度范围内单独使用时，愈伤组织在茎段的顶端形成，呈浅绿色致密状态，但比低浓度下2，4-D、6-BA及IAA三者配合使用时显疏松[9]。随6-BA浓度的增大，愈伤组织诱导率也出现增大的趋势，但没2，4-D的诱导率高，仅能达到30%，且转接时间宜在培养2-3周时开始转接，否则易产生褐变。从近几年的试验情况来看，在1.0-3.0mg/l的浓度范围内，6-BA诱导出的愈伤组织，6-BA浓度越低，发生褐变的时间越短[10]。因此，单独使用6-BA时，可考虑再加大浓度的使用范围。 以上是近几年的试验研究中诱导出的三种不同形态的愈伤组织，究竟何种愈伤组织及培养基更易分化培养形成铁线莲的组培苗还有待进一步的探索研究[11]。 3.2 选择方案 ① 诱导培养基的选择： (1)MS+6-BA0.5mg·L-1(单位下同)+NAA0.05+3%蔗糖； (2)MS+6-BA0.5+NAA0.1+2，4-D0.1+3%蔗糖； (3)MS+6-BA2.0+NAA0.1+3%蔗糖[12]。 ② 增殖分化培养基的选择： (4)MS+6-BA1.0+NAA0.1+3%蔗糖； (5)MS+6-BA2.0+NAA0.1+2，4-D0.01+3%蔗糖； (6)MS+6-BA2.0+NAA0.05+3%蔗糖[13]。 ③