培训课件--地中海贫血基因检测系统.ppt

PCR扩增 用生物素标记的引物扩增待测样品DNA PCR-Mix-I 23μL DNA模板 2μL Total 25μL 50℃ 15min 95℃ 10min 94℃ 1 min 50℃ 30s 35 cycles 72℃ 30s 72℃ 5min 取15 mL 塑料离心管，放入膜条，加入A液5-6 mL及PCR产物。将塑料管放入沸水中加热10分钟，取出拧紧盖子， 放入42℃杂交箱杂交1.5—4小时。 ? 变性及杂交 洗 膜 取出膜条，移至装有预热B液的50 mL管中， 于42℃轻摇洗涤15分钟 ?   显 色 1）POD溶液孵育30分钟 2）洗涤 用A液室温洗两次，每次5分钟。 3）显色 将膜条浸泡于显色液中避光显色10-15分钟即可见斑点显现。 N/N 654M/N 41-42M/N 结果判读 41-42N 654N －28N 71-72N 17N βEN 31N 27/28M 41-42M 654M －28M 71-72M 17M βEM 31M IVS1-1M 43M －32M －29M －30M 14-15M CAP IntM IVS1-5M 654M/71-72M 17M/N βEM/βEM 41-42M/N 公司地贫产品市场 华南地区:广东,广西，海南 西南地区:四川,贵州 福建、江西 湖北 市场上同类产品生产厂家 益生堂(深圳创益生物科技) 广州达安 上海博星 上海透景公司 地贫的临床治疗和预防 治疗 定期输血 定時注射除铁药物 骨髓或脐带血移植 基因治疗 预防 遗传咨询 基因筛查 产前检查 谢谢！ 亚能生物技术（深圳）有限公司 * 成人血红蛋白（Hb）由四个亚基 （α２β２）组成。 * f地贫者：MCV＜80fl,or红细胞脆性实验＜60% Hb电泳法：a-地贫诊断： HbA2＜2.5%或Heinz小体（亨氏小体）阳性 b－地贫： HbA2.3.5%或 HbA2.3.5%且 Heinz小体阳性，为双重杂合子。 重型b－地贫： HbF含量 ＞60% 标准详见：黎绿浪，吴锦泉，成人标准型a-地贫的实验诊断，中华血液学杂志，1988，9（4）:198 * 16号染色体短臂未端的珠蛋白基因簇 * 目前发现的α-地贫突变类型至少有81种，46种点突变，35种缺失突变。见毛江洪， α-地贫的研究现状，实用临床医学，2005，6（3）：134－136 * α －珠蛋白基因簇包括二个重复的α基因,一个胚胎期α类基因,三个假基因,一个功能未明的基因,全长约30kb. * ?-地中海贫血游行病学资料表明，突变的类型、频率具有明显的种族性和地域性差异。 目前为止，全世界上已发现186多种?-地中海贫血突变，主为为点突变。其中中国已发现21种。 见：Huisman THJ,The Thalassemia repoitory Hemoglobin ,1998,3:287-310 * CD:密码子 IVS:插入序列 ?＋: ?-珠蛋白链缺失 ?0 :?-珠蛋白合成不足 * 非缺失型: a基因发生点突变或少数几个碱基的缺失. 缺失型是我国a地贫的主要类型,但非缺失型所占比例也不容忽视. 对于a+地贫基因,广东,四川,香港,台湾以-a3.7 占优势, * CD41-42，654为我国南方高发区的主要突变类型。 广西：－28，CD17较高，四川、贵州CD17较高 * 在HBB1，HBB2区域设计1对引物，扩增中国人常见的突变类型，在HBB3区域设计另一对引物，主要为检出IVS－2－654突变。两扩增片段长般分别为650，470bp HBB gene: ?-珠蛋白基因 地中海贫血基因检测在临床诊断上的应用 亚能生物技术（深圳）有限公司 地中海贫血 地中海贫血，又称海洋性贫血，是一种常见的单基因遗传性溶血性血液疾病。 广泛分布在全世界沿海地区。 中国常见于东南沿海、西南 地区以及台湾地区。 地中海贫血的分布 地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一 地中海贫血 地中海贫血的共同特点是由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少或不能合成，致使血红蛋白的组成成分改变。 地中海贫血分为α-地中海贫血和β-地中海贫血。 人类不同时期血红蛋白的组成 胚胎期血红蛋白： Hb Gower 1 （x2 e2 ） Hb Gower 2 (a2 e2) Hb Portland (x2 g2) 即Hb Portland 1 另有少量Hb Portland 2 (