中西医结合导论第三章研究方法概要.ppt

主要内容与要点导航 主要内容 第一节　中西医结合基础研究方法 第二节　中西医结合临床研究方法 要点导航 了解现代实验方法 理解现代试验方法在中医药研究中运用 掌握中西医结合临床研究方法 第一节　中西医结合基础研究方法 一、分子生物学研究方法 二、细胞生物学与组织形态研究方法 三、生物化学研究方法 四、医学免疫学研究方法 五、功能学研究方法 六、中药化学研究方法 七、系统生物学研究方法 八、动物实验与中医药研究 第一节　中西医结合基础研究方法 一、分子生物学研究方法 生命是由蛋白质、核酸等生物大分子组成的一个复杂体系，具有自我复制、自我更新、自我调控以及对内外环境刺激做出选择性反应的能力，新陈代谢是其基本特征。 分子生物学主要研究细胞成分的物理、化学的性质和变化与生命现象的关系。如遗传信息的传递、基因的结构、复制、转录、翻译、表达调控和表达产物的功能，以及细胞信号的转导。 一、分子生物学研究方法 (二)原位杂交与核酸蛋白印迹 1、 原位杂交与核酸蛋白印迹技术 （1）原位杂交技术 是将分子杂交与组织化学相结合的一项技术 。分DNA-DNA杂交、 DNA-RNA 杂交 、RNA-RNA杂交三类。 （2）印迹技术：用于基因组DNA的定性定量分析 ①DNA印迹术，检测DNA结构及其差异的技术。 ②RNA印迹术，检测某一组织或细胞中已知的特异mRNA的表达技术。 ③蛋白质印迹术，用于特异蛋白质的存在、半定量等。 ④斑点及夹缝印迹杂交，用于基因组中特定基因及其表达的定性和定量研究。 原位杂交技术 是利用核酸分子碱基配对互补原理，用预先已标记了用以显示靶基因的已知DNA或RNA片段作为探针，通过探针与组织细胞中靶核酸分子的特异性结合，并借助免疫组织化学技术，在组织细胞原位显示某一特定基因及其转录产物mRNA。 一、分子生物学研究方法 (二)原位杂交与核酸蛋白印迹 2、在中医药研究中的应用 原位杂交技术涉及中药细胞及机体组织细胞特定核酸在染色体中的精确定位，观察特定基因在细胞中的表达水平、确定组织中有无特异性的细菌与病毒等病原体的感染及中医药在核酸水平的干预效应。 技术印迹应用于中药品种的改良，判断某一中药对基因转录的调控作用。 一、分子生物学研究方法 （三）基因组学与蛋白质组学 1、基因组学与蛋白质组学技术 （1）基因组学研究内容及技术 ①结构基因组学：以全基因组测序为目标。 ②功能基因组学：以功能鉴定为目标 （2）蛋白质组学技术 ①蛋白质分离技术 ②蛋白质鉴定技术 一、分子生物学研究方法 （三）基因组学与蛋白质组学 2、在中医药研究中的应用：比较同病异证和异病同证 建立了“证候-基因表达谱”。 蛋白质组学技术应用分两类： 一是中医药对某一已知蛋白表达调控作用； 二是通过用药前后组织或细胞的差异蛋白质组展开来评价中药的疗效。 一、分子生物学研究方法 （四）生物芯片 1、生物芯片技术：分为基因芯片、蛋白质芯片、肽芯片、细胞芯片、组织芯片、物种鉴定芯片、、和基因组分型芯片、药物芯片等。 （1）基因芯片技术 是同步、高效、快速和低成本，可分为分析芯片、检测芯片和诊断芯片等。 （2）蛋白质芯片技术 是一种高通量的蛋白质给你分析技术。 2、在中医药研究中的应用 在中医药有效疗法及药物的筛选方面。 二、细胞生物学与组织形态学研究方法（一）细胞与组织形态学结构研究 1、细胞与组织形态学结构染色及观察 （1）染色方法：组织细胞；血细胞 （2）细胞与组织形态学结构的形态观察 显微镜分为： 光学显微镜（普通光学、荧光、相差、微分子干涉、暗视野、倒置、激光扫描共焦显微镜）； 电子显微镜（投射、扫描电子显微镜）； 扫描探针显微镜（扫描隧道、原子力学显微镜）。 2、在中医药研究中的应用 形态学观察是中西医研究疾病发病机制、转归、疗效评价及中药品质鉴定等最常用的手段。 二、细胞生物学与组织形态学研究方法（二）细胞和亚细胞组分分析 细胞和亚细胞组分的分析主要利用细胞化学分析技术。细胞化学分析技术是在保持组织、细胞原有生活结构状态机化学成分的基础上，利用物理学、化学、免疫学、分子生物学等原理与技术手段，对组织与细胞内的化学成分及其变化规律进行定性、定位、定量研究的技术。 在中医药研究中应用于检测人、动物等有机体的不同发育阶段、不同组织部位及其异常生理、病理状态下细胞内结构或功能成分的表达及变化特点。 二、细胞生物学与组织形态学研究方法（三）细胞工程技术 细胞工程是细胞生物学与遗传学的交叉学科，利用细胞生物学的原理和方法，结合工程学的技术手段，按照预先设计，有计划地改变或创造细胞遗传性的技术。 在中医药研究中