培训课件--肠道内病原hl实验三.pptVIP

实验三肠道内及组织内病原 实验目的 掌握肠道致病菌与非致病菌的常用鉴别方法。 学习组织内及血液内病原的检查方法 了解肠道杆菌的生化反应。 学习分区划线接种法。 实验内容 大肠杆菌、痢疾杆菌的EMB、SS培养基的接种。 溶血现象示教：完全溶血及不完全溶血现象 咽拭试验 血浆凝固酶试验：玻片法 抗“O”试验 实验原理 EMB、SS培养基鉴别肠道致病菌及非致病菌的原理。 EMB（伊红美兰培养基）： 蛋白胨　　　 乳糖　　 　　 磷酸氢二钾　　　 琼脂　　 　　 2%伊红Y溶液　（酸性染料—指示剂） 　　 0.65%美蓝溶液　（碱性染料） EMB平板（伊红美蓝琼脂培养基） 原理： 细菌 乳糖 产酸：伊红＋美蓝 紫黑/紫红 结果： 非致病菌 致病菌 分解 菌落变黑，有金属光泽 菌落无色、半透明 肠道致病菌与非致病菌 在EMB培养基上的生长 SS培养基： 蛋白胨　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　 乳糖　　　　　　　　　　　 柠檬酸钠　　　　　　　　　 硫代硫酸钠　　　　　　　　　 10%柠檬酸铁溶液　　　　　　 1%中性红溶液（酸性指示剂）　　　　　　　　 0.1%煌绿溶液　　　　　　　　 SS平板--分离肠道致病菌的强选择培养基 原理： 胆盐、枸橼酸钠、煌绿： 抑制肠道非致病菌 2.乳糖、中性红（pH6.8-8.0，红→橙黄） ： 致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨产生 碱性物质→菌落淡黄色； 大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色。 致 病 菌:小,无色,半透明 非致病菌:大,红色 实验材料 每组四块培养基：两块EMB、两块SS培养基 大肠杆菌、痢疾杆菌斜面培养物 接种环 酒精灯 实验步骤 将大肠杆菌以分区划线的方式分别接种至EMB、SS 培养基上。 将痢疾杆菌以分区划线的方式分别接种至EMB、SS 培养基上。 将接种好的培养基置入37℃培养箱培养24小时。 记录并分析结果。 分区划线法 （得到单个菌落做纯培养） 肠道杆菌的生化反应 细菌 葡萄糖 甘露醇 乳糖 靛基质 硫化氢 动力 痢疾杆菌 ﹢ ﹢ －/﹢ － － 伤寒杆菌 ﹢ ﹢ ﹢ ﹢ 大肠杆菌 ﹢ ﹢ ﹢ ﹢ － ﹢ — — － 伤寒 葡萄糖 甘露醇 乳糖 靛基质 硫化氢 动 力 大肠 葡萄糖 甘露醇 乳糖 靛基质 硫化氢 动 力 四、抗“O”实验： 1、实验原理 2、应用 3、操作：图示 4、观察结果：是否有凝集现象 1、阴性对照 2、待测血清 4、抗原