培训课件_真菌检验送检SOP.pptx

侵袭性真菌病临床实验室诊断操作规范本标准依据GB/T1.1-2009给出的规则起草本标准由卫生部临床检验标准专业委员会提出本标准起草单位：中国医学科学院北京协和医院、北京大学第一医院、复旦大学附属华山医院。本标准起草人：徐英春、李若瑜、章强强、王瑶、王贺、余进、郭莉娜、张丽、范欣。侵袭性真菌病临床实验室诊断操作规范概述本标准规定了侵袭性真菌病临床实验室诊断操作规范、包括标本采集处理、形态检查、培养检查、真菌培养鉴定、非培养诊断方法和药物敏感试验。本标准适用于具有∥级生物安全防护能力的临床实验室。术语和定义1. 侵袭性真菌病 IFD指真菌侵入人体组织、血液，并在其中生长繁殖所致组织损害、器官功能障碍、炎症反应的病理改变及病理生理过程。根据患者宿主因素、临床特征和微生物学检查、将IFD诊断分为确诊(proven)、拟诊(probable)和疑似(possible)。2. 最小抑菌浓度 MIC按照标准操作规程进行体外真菌稀释法或连续浓度梯度稀释法药物敏感性试验时，在特定培养时间及温度的条件下，能导致特定程度肉眼可见真菌生长抑制的最低药物浓度。3. 剂量依赖敏感 S-DD给予高于常规给药剂量，且达到最大血药浓度时，临床有效。4. 最低有效浓度 MEC指曲霉在含系列浓度的棘白菌素类药物的培养基中培养时，与生长对照孔中的菌丝形态相比，菌丝变短、变圆、变粗的最低药物浓度。5. 折点 breakpoint临床上能抗菌药物对真菌分为敏感、耐药、中介或剂量依赖敏感的特定MIC值。折点系综合体外的MIC值、耐药机制、 抗菌药物PK/PD参数及临床疗效而得出，还可能随环境改变而改变（如感染部位、常规给药剂量的改变、给药途径及频次的改变） 。6. 消化液 lysis solution粘液溶解作用，用于呼吸道标本等的前处理，常用N-乙酰-L-半胱氨酸、 5%草酸或二巯基苏糖醇等。标本采集及处理采集部位消毒一步法：葡萄糖酸氯己啶作用 30s，或 70%异丙醇消毒后自然干燥。三步法：(1) 70%乙醇擦拭静脉穿刺部位，作用 30s 以上、待干；(2) 1%-2%碘酊从穿刺点向外画圈消毒至消毒区域直径3cm，作用 30 s 或 10 %碘伏作用 60 s； (3) 70 %乙醇脱碘：对碘过敏者， 用70%乙醇消毒 60s，待乙醇挥发干燥、采集标本。血液标本采集推荐在抗真菌药物使用前，发热初期或寒颤期、采静脉血或骨髓液。立即注入血培养瓶内并轻轻摇匀。至少采集 2 套。标本与培养基比例为 1/10-1/5（成人每瓶 8-10ml）、必须包括需氧瓶或真菌瓶。血液标本处理2h 内常温送检。若不能及时送检，则常温保存。不能送检时，常温保存2h 内常温送检评估导管相关性血流感染（ CRBSI）如患者已拔管，应采集 2 套外周血进行培养，同时做导管尖 Maki 法半定量培养（导管尖长 5cm），如 1 套及以上外周血培养阳性，导管尖培养阳性（ ≥15 CFU），且血培养与导管尖培养菌种相同，即为 CRBSI。如患者尚未拔管，应至少采集 1 套外周血培养，同时尽快采集等量的导管血进行培养，如导管血与外周血培养均阳性，导管血阳性时间比外周血早 2h，或导管血中菌量为外周血中菌量 5 倍以上，且没有其它明确感染源，即为 CRBSI；如导管血培养阴性，外周血培养阳性且为念珠菌属，且没有其它明确感染源，也可能为 CRBSI。骨髓标本采集使用肝素化的注射器或溶解离心管采集骨髓液 0.5ml（儿童）至 3ml（成人）后送检。骨穿操作采集足量骨髓液送检一次性骨穿包骨髓标本处理15 分钟内常温送检。若不能及时送检，则常温保存。不建议常规做骨髓液培养，如需培养可将骨髓液接种于培养瓶，但易出现假阳性。骨髓液需同时做吉姆萨染色镜检。15分钟内常温送检骨髓涂片 （吉姆萨染色镜检）静脉导管标本采集剪取导管尖段 5cm 置于无菌容器中送检。送检导管尖段 5cm无菌容器静脉导管标本处理一15分钟内常温送检。若不能及时送检，则4°C保存。15分钟内常温送检4°C保存静脉导管标本处理二将导管置于血平板上，使用无菌镊子将其从平板一端滚动至另一端，滚动4次，做导管尖Maki法半定量培养。不要使用含放线菌酮的培养基。无菌体液（脑脊液、心包液、腹水和关节液）标本采集除脑脊液外，将其余的无菌体液置于含肝素的无菌真空采血管。脑脊液使用脊髓穿刺针采取后送检。无菌体液（脑脊液、心包液、腹水和关节液）标本处理一不能送检时，常温保存15min 内常温送检15 分钟内常温送检。 若不能及时送检，则常温保存（不能冷藏）。无菌体液（脑脊液、心包液、腹水和关节液）标本处理二标本大于 2ml，则 2000g 离心10 分钟，取沉渣接种。若标本量少于 2ml，则将标本直接接种于培养基。推荐使用细胞离心机对无菌体液进行涂片镜检。脑脊液