培训课件_快速胶体免疫层析法检测临床应用.pptx

胶体-金-免疫层析法检测在医学实验室应用的需要注意若干问题王洛平 mailto:lpwang2012@lpwang2012@2015-10大兴区质控中心专项发展历史 免疫标记学可追溯到60年代。随着新理论涌现、单克隆技术与纳米工艺开发，70年代以胶体金为代表的标记免疫分析技术突起，迅速进入实验室常规工作中，成为继酶免放免荧光免疫三大技术之后，又一个庞大的试验技术应用体系，其产品广泛用于健康体检，流行病学调查，临床疾病快筛筛查，酒驾测试，毒品检测，食品安全检测等方面，，，，2015-10大兴区质控中心专项使用现状★ 基层医院实验室或者大型医院门诊部为满足临床患者急迫 诊疗需要，采用胶体（金/硒）免疫层析法检测★ 基于胶体金免疫层析法属于定性实验（无室内质控，有些 用仪器半定量结果表达）范畴，灵敏度无法与定量实验比 较，检测低水平抗原或抗体有时会发生漏检，目测方法会 受到实验室光线影响等干扰，容易产生一些假阴性或假阳 性结果 如何做好技术防范？2015-10大兴区质控中心专项临床实验室胶体金检测条（卡）常用种类1、乙型肝炎表面抗原检测试纸卡2、HIV（1/2）抗体检测试纸卡3、潜血（Hb）检测试纸卡4、轮状病毒（F-RV， A群）抗原检测试纸卡5、HCG检测试纸卡6、降钙素原（PCT）检测试纸卡7、甲/乙型流感病毒抗原检测试纸卡、、、、、、、、达百种2015-10大兴区质控中心专项产品种类之一2015-10大兴区质控中心专项检测原理认真阅读产品说明书，了解方法学种类熟知产品检测灵敏度及时告知临床方法局限性：限于初步筛查； 限于操作人员判断经验；限于单一项目检测2015-10大兴区质控中心专项方法学图示快速诊断技术之一：免疫胶体金免疫层析分析检测 (colloidal gold immunochromatography assay, GICA ) 是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体检测的一种新型的免疫标记技术 有三种反应模式：夹心法，间接法，竞争抑制法见下面图示3-52015-10大兴区质控中心专项 胶体金颗粒对蛋白质有很强的吸附功能，而不被坏其生物活性，可以与蛋白质等（葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白）等非共价结合，形成胶体金标记物。2015-10大兴区质控中心专项胶体金免疫层析试纸条的构成图示1样品垫金标垫膜吸收垫衬板2015-10大兴区质控中心专项图示2标本处理后，加样行进方向2015-10大兴区质控中心专项夹心法反应原理图示3B 阳性C 阴性2015-10大兴区质控中心专项图示4间接法反应原理B 阳性C 阴性2015-10大兴区质控中心专项图示5竞争抑制法反应原理阴性阳性 弱阳性检测线颜色强度与SD（磺胺嘧啶）浓度负相关2015-10大兴区质控中心专项结果判定抗原/抗体检测试纸卡 两条（红或紫或绿）线， 阳性 一条线， 阴性 无线，实验失败或试纸失效2015-10大兴区质控中心专项GICA优势 GICA确实是一种便捷检测方法，具有简单快速、通过肉眼或小型台式仪判定结果、无需复杂操作技巧和特殊设备、无污染、携带方便等优点 2015-10大兴区质控中心专项GICA技术问题限于初步筛查限于操作人员判断经验限于单一项目检测，目前已有组合项目试条出现，如甲/乙型流感病毒检测2015-10大兴区质控中心专项室内/室间质控最大问题：没有室内质控，其结果解释只作筛查，不作疾病诊断依据， IQC质控豁免试验。提醒临床多结果核对，例如血常规，CRP，PCT，，，室间比对：卫生部或北京市临检中心发已知仪器结果质控品，各家发回结果给予EQA评价2015-10大兴区质控中心专项案例一术前或孕期12周检查或创伤输血： 艾梅乙检查已纳入必检项目，择期手术或正常孕检标本可采用EIA或MEIA或ECL方法上机检测 急诊情况，快速筛查使用试条检测，如筛查结果是阴性，血清学仪器复检结果是阳性结果，临床大夫问：是否存在实验室检测方法学问题 回答：肯定会这种情况，方法学自身局限性问题2015-10大兴区质控中心专项HIV（1/2）抗体检测试条1513-1514阳性?（胶体硒法）1513-1514阳性（胶体金法）2015-10大兴区质控中心专项仔细观察后！2015-10大兴区质控中心专项案例二某公司便潜血检测试条HBsAg检测试条HGB检测浓度: 试剂标定灵敏度0.2ug/ml(检测范围0.2~2000ug/ml=0.0002~0.2g/L)换算公式: 1ug/ml=0.000001g/0.001L=0.001g/L判定： 预试验0.2ug/ml根本肉眼看不出。所以科室要求只要看见检测线就报阳性曾验证4家市场上最常用试条检测灵敏度实验发现，仅美国雅培试条能检出说明书标定检测灵敏度，其他试条均捡不出2015-10大兴区质控中心专项案例三轮状