培训课件_细菌药敏试验.ppt

* * 常规测试并报告的药物分组(3) 流感嗜血杆菌 肺炎链球菌 一级 氨苄西林，青霉素 青霉素，红霉素 复方磺胺 复方磺胺 二级 头孢呋肟，头孢噻肟 氧氟沙星，四环素 头孢他啶，氯霉素 万古霉素 三级 阿奇霉素，头孢克罗 氯霉素，利福平 环丙沙星，亚胺培南 利福平，四环素 * * 预报用药(一) 测试药 菌名 推测其他药物的敏感性 苯唑西林 葡萄球菌 所有β-内酰胺类 四环素 所有（除葡 多西环素，米诺环素 萄球菌和不 动杆菌〕 红霉素 G＋球菌 罗红霉素，克拉霉素， 阿奇霉素 克林霉素 所有 林可霉素 * * 预报用药(二) 测试药 菌名 推测其他药物的敏感性 氨苄西林 肠球菌 青霉素 青霉素G 葡萄球菌 氨苄西林，美洛西林 替卡西林 头孢噻吩 肠杆菌科 头孢拉定，头孢氨苄 头孢克罗 奈啶酸 肠杆菌科 所有氟喹诺酮类 万古霉素 所有 替考拉宁 以一定浓度的抗菌药物与含有被试菌株的培养基进行一系列不同倍数稀释（通常为双倍稀释），经培养后观察其最低抑菌浓度。 稀释法中用琼脂培养基者为琼脂稀释法，用肉汤培养基者为肉汤稀释法。 药敏试验-稀释法 常用抗菌药物容积稀释法 步骤 浓度 （mg/mL） 来源 体积(mL) CAMHB(mL) 最终浓度（mg/mL） 1 5120 储存液 1 9 512 2 512 步骤1 1 1 256 3 512 步骤1 1 3 128 4 512 步骤1 1 7 64 5 64 步骤4 1 1 32 6 64 步骤4 1 3 16 7 64 步骤4 1 7 8 8 8 步骤7 1 1 4 9 8 步骤7 1 3 2 10 8 步骤7 1 7 1 11 1 步骤10 1 1 0.5 12 1 步骤10 1 3 0.25 13 1 步骤10 1 7 0.125 原理： 聚乙烯板内含有各种稀释度的抗菌药物，实验时 加入100μl浓度为105 CFU/ml的菌液，盖上盖板，35℃ 16～20h观察结果。孔底部清晰不出现细菌沉淀的最低 抗菌药物浓度即为该抗菌药物对细菌的最小抑菌浓度， 通过CLSI标准判断其敏感和耐药。再取0.01ml容量接种 环取肉眼观察无菌生长的液体接种于血琼脂平板作次代 培养，经35℃过夜培养后观察最低抗菌药物浓度能杀死 99.9％原始种入的细菌即为该菌的最低杀菌浓度(MBC)。 微量液体稀释法 (microdilution test) 操作方法：1.抗菌药物的稀释和融解 2.在微量聚乙烯微板孔中加入各种不同浓度的抗生素 100μl，从低浓度往高浓度加样，不需要更换吸管。 3.挑选18~24小时的菌落置M-H肉汤增菌4~6小时。 4.制备0.5麦氏比浊管，然后1:200稀释，使之最终 浓度105 CFU/ml。 5.用微量加样器接种100μl 到96孔中，盖上盖板。 同时作阳性、阴性对照。 6.手工看浊度或仪器自动 判读。按照CLSI标准报 告细菌对某抗菌药物为 敏感、耐药和中介。 阅读结果的正确光源 细 菌 反射光 透射光 细 菌 反射光 透射光 肠杆菌科细菌 √ 肺炎链球菌 √(移去盖子) 铜绿假单胞菌 √ β- 、草绿色链 √(移去盖子) 不动杆菌属细菌 √ 嗜血杆菌属 √ 伯克霍尔德菌 √ 淋病奈瑟菌 √(移去盖子) 葡萄球菌 √ VAN、OXA、LIN 脑膜炎奈瑟菌 √(移去盖子) 肠球菌 √ VAN 弧菌属 √ 注：阅读葡萄球菌中应注意的纸片法药敏结果是任何有可见的菌落生长均应视作 对VAN、OXA、LIN抗菌药物耐药 * * 肉汤稀释法 4 8 16 32 64 128 256 ug/ml 混 混 清 抗生素倍比稀释，种菌105CFU/ml ， 孵育35℃， 16～20h，判读。 * * 琼脂稀释法 浓度 16 32 64 128