培训课件_检验科微生物室.ppt

纸片扩散法操作步骤 制备接种物（0.5麦氏单位） M-H琼脂平板上（15分钟内接种，涂抹均匀） 在接种好的琼脂平板上贴加纸片 孵育（15分钟内反转平板，35°C空气孵育） 苛养菌5％CO2孵育 判度结果和解释结果 ESBL确认试验 ESBL的质控频率 筛选试验和表型确证试验均可每日进行或每周进行，所选择菌株为肺克700603或大肠埃希菌25922。 应该注意的是：肺克700603ESBL基因在质粒上，应将其冻存于-60℃或以下。 奇异变形杆菌 ESBL 监测试验 不适用 不适用 Ceftriaxone 1 ?27 Cefotaxime NA NA Aztreonam 1 ?22 Ceftazidime 1* ?22* Cefpodoxime 稀释法 (μg/ml) 纸片扩散法 (mm) Drug 可诱导的克林霉素耐药 (erm-介导) 常规D－试验: 阳性 15 ?g 红霉素纸片及 2 ?g克林霉素之间距离为15-26. “D Test” –阳性反应 纸片扩散法判读结果 将游标卡尺置于反转的平板的背面，测量到最接近的整数毫米数。平板应距离一个黑色不反光的背景数英寸，并用反射光照明。 如果是加血的琼脂培养基，则应在透射光照射下，打开培养皿盖，从上表面测量抑菌圈。 如果被测菌是葡萄球菌或肠球菌，则应孵育24小时，再在透射光下分别观察苯唑西林或万古霉素的透明抑菌圈内有无耐甲氧西林或耐万古霉素菌落的微弱生长，遇不敏感的结果需用稀释法测定MIC法确 变形杆菌(迁移生长)以及磺胺类药物的纸片法药敏忽略薄纱样蔓延生长，微弱生长（20%或更少），克林霉素对葡萄球菌的抑菌圈内如有薄雾状菌苔应报告细菌对克林霉素耐药,不管其是否显示“D”抑菌圈 五、实验后质量控制 药敏结果结果的审核 S-敏感（Susceptible）：用常规用量治疗有效，常规用药时达到的平均血药浓度超过细菌的MIC 5倍以上。 R-耐药（Resistance）：用常规用量治疗不能抑制细菌的生长，MIC高于药物在血、体液中可能达到的浓度。 I-中介 (Intermediate)：MIC接近血、体液中药物的浓度，治疗反应率低于敏感株，药物生理浓集部位有效(泌尿道)，加大用药剂量可能有效。 常见细菌的耐药问题 肺炎链球菌—PRSP 肠球菌—VRE 葡萄球菌—MRSA、VRSA 肠杆菌属—AmpC 超级细菌—NDM-1（Ⅰ型新德里金属－β－内酰胺酶 ） 以上的耐药问题都为目前全球最关注的细菌耐药问题，也是我们在工作中要特别注意的问题  临床微生物实验室报告制度的规范 临床微生物实验室应对不同的细菌检验报告时间和内容应有相应的规定，并告诉临床各科，依此可防止不明原因的报告延迟。 应分两种报告形式： 危重感染报告: 常规报告: 报告的规范化 1.涂片报告 革兰染色：危重报告30－60分钟报告。报告内容应包括染色反应、是细菌或真菌、细菌形态。有无细胞内吞嗜现象，有无菌丝。 抗酸染色：报告抗酸染色阳性或阴性；菌量以加号表示。常规报告24h,危重报告1h－2ｈ。 2.血液和无菌体液培养的报告制度 实行三级报告制度： 第一级：培养液直接涂片结果； 第二级：初步药敏结果和平皿菌落涂片结果； 第三级：正式细菌鉴定和药敏报告。 报告的规范化 3.便培养 24小时可发出初始报告; 72小时应报告药敏试验结果； 根据检测范围报告检测结果，如未检测出沙门菌、志贺菌。 错误报告: 未见到致病菌 4.尿培养：可在24小时报告初始结果，包括菌落计数和可能细菌种类，如氧化酶阴性的革兰阴性杆菌；金黄色葡萄球菌等。 5.痰培养：24小时初始报告，报告内容包括痰标本是否合格，优势细菌，金葡菌、铜绿假单孢菌等特征明显细菌的鉴定结果。 6.分泌物报告：24h初始报告，有无细菌生长；革兰阳性或阴性细菌或特征明显的细菌名称；根据涂片结果推测致病菌。 临床微生物检验常见问题及解决方法 标本合格率低—制定标本采集、运送、评估及处理手册，并进行宣传培训等 苛养菌分离率低—培养基质量、培养环境及人员水平 结果准确性不高—操作规范化及检验前、中、后质量保证 质量控制中存在的问题—制度执行 细菌耐药性监测工作还不能适应抗感染治疗需要—快速、准确的病原学报告及药敏试验结果 使用CLSI标准不规范可能造成的错误—依据CLSI选药，结合本院用药 细菌检验基础知识不扎实可能出现的问题—人员基本功提高、学习、培训 七、工作中常见的问题和解决方法 常见报告结果与临床期待结果不一致的情况 ?临床认为有细菌感染而培养阴性 ?药敏结果与临床治疗不符 ?培养的细菌认为是污染菌 ?