植物组织培养实验报告.doc

植物组织培养实验报告 实验时间：2月28号—6月6号 指导老师：… 姓名：… 班级：园艺1001 学号：181001.. 实验阶段一 母液配置（贮备液2）3月14日 一、实验目的 学习如何清洗仪器、校准天平、以及配置母液 二、实验原理 配置培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配置，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配置即可。 三、试剂和仪器 1、试剂 KI、H3BO3、MnSO4﹒4H2O、Na2MoO4﹒2H2O、ZnSO4﹒7H2O、CuSO4﹒5H2O、CoCl2﹒6H2O 2、仪器设备 电子天平、磁力搅拌器、烧杯、容量瓶（100ML）、玻璃棒、试剂瓶 四、实验步骤 1、清洗仪器（容量瓶、烧杯、试剂瓶、玻璃棒等） 2、打开电子天平，去皮。 3、配置贮备液2 （1）秤取KI 8.3mg、H3BO3 62mg、MnSO4﹒4H2O 223mg、Na2MoO4﹒2H2O 2.5mg、ZnSO4﹒7H2O 86mg分别溶解于约10ml蒸馏水中。 （2）秤取CuSO4﹒5H2O 25mg、CoCl2﹒6H2O 25mg分别溶解于100ml蒸馏水中，分别量取1ml与其它试剂混合，搅拌均匀，再加水定容至100ml。 （3）倒入试剂瓶中，贴好标签，放入冰箱冷藏保存。 实验阶段二 培养基配制与灭菌3月21号 一、实验目的 学习母液法配制培养基以及掌握培养基灭菌的方法 二、实验原理 组织培养所用的培养基含有植物生长所必需的各类营养物质，同时也是微生物繁殖的极好场所，因此必须对培养基灭菌处理，以确保无菌操作的顺利进行。 三、试剂及仪器设备 1、试剂 琼脂、蔗糖、混合培养液（贮备液1~4）、NaOH、稀HCl 2、仪器设备 电子天平，高压灭菌锅、烧杯，量筒，移液管，玻璃棒，药匙，称量纸，PH计，电炉，培养瓶等 四、实验步骤 1、准备50个培养瓶、洗净后用蒸馏水冲洗干净。 2、准备5个加盖的干净培养皿，并在底部加上滤纸，并用报纸包扎好有待灭菌。 3、培养基配制 （1）分别量取贮备液Ⅰ--25ml，贮备液Ⅱ--5ml，贮备液Ⅲ—5ml，贮备液Ⅳ—5ml混合。 （2）加入约250ml左右的蒸馏水，再加入15g蔗糖溶化。 （3）用粗天平秤4g琼脂放入1000ml瓷缸中，加水至500ml，用pH计调酸碱度，pH在5.8左右。 （4）加热至琼脂全部溶解。 （5）将溶液均匀倒入培养瓶中，每个瓶约25ml，盖上瓶盖。 4、将步骤2中的仪器，配好的培养基、5瓶蒸馏水一起放入高压灭菌锅内，在121℃下高温灭菌。 5、取出培养基置于实验台上，将其他用具放在烘箱内烘干并取出置于实验台上。 五、实验现象 3月28日观察发现,培养基全部凝固。 实验阶段三 圣女果和荷兰马齿苋种子接种3月28号 一、实验目的 1、了解组织培养的基本程序。 2、掌握接种的方法和材料的培养过程。 3、掌握无菌操作技术 二、试剂及仪器 试剂：75%酒精、95%酒精、0.1%HgCl2、圣女果种子、荷兰马齿苋种子 仪器：烧杯、移液管、量筒、长镊子、解剖刀、超净工作台、剪刀 三、实验步骤 1．准备两个干净的小烧杯：配置（1）70%~75%酒精 100ml （2）0.1%HgCl2 100ml 2. 在无菌操作室内，超净工作台上放入：（1）用报纸包扎好的灭菌过的镊子、剪刀、（2）培养皿（已灭菌）（3）酒精灯（4）打火机（5）无菌水 （6）酒精棉球（7）试管架 （8）废液缸 （9）95%酒精 （10）75%酒精 （11）0.1% HgCl2 。用酒精棉球擦拭台面，打开紫外灯灭菌30Min。 3．浸泡种子 （1）将圣女果和荷兰马齿苋种子倒入烧杯中，用1层纱布放在烧杯口，用牛皮筋扎好。 （2）在自来水下冲泡30Min以上 （3）倒去水，除去纱布，放入超净工作台。 4．接种 （1）用酒精棉球擦拭双手。 （2）将种子用75%酒精洗30秒，倒尽。 （3）将种子用0.1% HgCl2 浸泡10Min. （4）用无菌水洗5次，第六次倒入无菌水，不倒出 （5）取1个培养皿，打开放在酒精灯旁 （6）用镊子夹取20粒左右种子放在滤纸上 （7）打开一个培养基在酒精灯附近，用镊子将种子夹取在培养基内，每个培养基斜上45°接种，每个培养基内放入4~5粒种子，均匀放置。 （8）将培养瓶口在酒精灯上烧一圈，盖上瓶盖。 （9） 重复（5）~（8）步骤. （10）将接好种的培养基放在生化培养箱内，25℃