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超声提取蜂花粉中黄酮的工艺研究 饶金辉 付志玲 袁岩岩 陈素娥 朱小梅 李源 （西南大学 植物保护学院） 摘要：为了确定提取蜂花粉中黄酮的最佳提取条件，我们对两种不同的蜂花粉进行了提取工艺研究。方法：采用超声技术提取总黄酮,用比色法测定总黄酮含量.以芦丁为考察黄酮含量的指标，以提取温度和提取时间为考察因素，用紫外分光光度计测定蜂花粉中黄酮的含量并最终确定了最佳的提取条件。结果表明：超声提取的时间和温度对提取率有一定影响且温度对提取的影响较大；最佳工艺条件为：以油菜花粉为原料，提取温度为40 ℃，提取时间为20 min。 关键词：蜂花粉；黄酮；超声提取；含量测定 花粉是植物的雄性生殖细胞，它存在于雄蕊的花药之中。蜂花粉是蜜蜂采集花粉后用自己的唾液和花蜜粘合形成的颗粒，比单一花粉更有营养价值[1]。 现代科学研究发现，花粉中除含有蛋白质、脂肪、糖类、维生素和矿物质等营养元素外，还含有磷脂、黄酮类化合物、乙酰胆碱、甾醇类化合物等生物活性成分，被人们誉为“微型营养库。”药理实验研究表明，花粉具有降血脂、抗辐射、增强机体免疫功能、保护肝脏、治疗前列腺增生及抗衰老等作用[2]，因此，在国内外引起了研究和开发利用蜂花粉的热潮。 我国有极其丰富的蜂花粉资源， 由于蜂花粉含有丰富的营养物质， 对其应用已有很悠久的历史。其提取成分广泛用于保健品及化妆品的生产。为了合理地开发、利用这一营养宝库，确定蜂花粉营养成分的最佳提取条件具有重要意义。因为黄酮类化合物具有降脂、抗血栓、抗氧化、降糖等多种生理活性。因此利用超声技术提取蜂花粉中黄酮[3]可大大地加快反应速度，有效地提高回收率和药材的利用率。本试验旨在确定蜂花粉的最佳提取工艺。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 样品与试剂 油菜花粉、荞麦花粉由唐氏蜂业有限公司提供；芦丁纯品由天津市海光化工有限公司提供；乙醇由西南大学制药工程实验室提供；亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠由西南大学制药工程实验室提供 1.1.2 主要仪器 超声提取仪KQ5200E型，昆山市超声仪器有限公司；紫外可见分光光度计752S，上海棱光技术有限公司；电子天平JT210N，上海精天电子仪器有限公司。 1．2 方法 1.2.1 芦丁标准液及标准曲线的制备 将98%的芦丁溶液（第1组 0. 5ml,第2组为 1.0 ml，第3组为 2.0ml，第4组为 3.0 ml，第5组为 4.0 ml）放入试管中；再加入5%的亚硝酸钠 0.3 ml;振荡 6 min后加入 10% 的硝酸铝溶液；摇匀再放置 6 min ,最后加入 1% 的氢氧化钠溶液 4.0 ml，加水稀释到 10 ml,在510nm处测得的吸收度A对浓度C回归。 1.2.2 超声提取工艺流程 取 2 g 蜂花粉溶入 20 ml的乙醇溶液中，超声提取、过滤、分离取上清液，取 2 ml 样品（蜂花粉的提取物）测定吸光度，最后计算总黄酮类物质的提出率. 1.2.3 黄酮含量的测定 准确量取 2 ml样品加入试管中，再加入5%的亚硝酸钠 0.3 ml;振荡 6 min后加入 10% 的硝酸铝溶液；摇匀再放置 6 min ,最后加入 1% 的氢氧化钠溶液 4.0 ml，加水稀释到 10 ml，在 510nm 处测样品的吸光度。 1.2.4 正交试验试验因素水平 主要考察提取时间、温度和不同药材对吸光度的影响。从而确定提取黄酮的最佳工艺条件。 2 结果与分析 2.1 实验结果 花粉 吸光度 因素 5（min) 10（min) 15（min) 20（℃） 40（℃） 20（℃） 40（℃） 20（℃） 40（℃） 油菜花粉 1 0.201 1.645 0.375 2.078 0.501 2.237 2 0.285 1.203 0.401 1.654 0.520 2.124 3 0.245 1.305 0.364 1.765 0.511 2.214 荞菜花粉 1 0.215 1.244 0.196 1.188 0.179 1.163 2 0.201 1.032 0.186 0.986 0.162 0.869 3 0.210 1.132 0.199 1.021 0.179 0.867 2.2 实验分析 从表中可以看出当都是油菜花粉时，提取时间越长吸光度就越大但是当都是荞菜花粉时，提取时间越长吸光度反而越小；温度大的吸光度要比温度小的吸光度大些。由此可见，花粉含量的不同、温度的不同、时间的长短会影响吸光度进而影响黄酮3 讨论 3.1 实验结果的直观分析和方差分析表明，蜂花粉黄酮提取的最佳超声工艺为：时间 15min