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第三章 细胞生物学研究方法 第三章 细胞生物学研究方法 ?细胞形态结构的观察方法 ?细胞组分的分析方法 ?细胞培养、细胞工程与显微操作技术 第一节 细胞形态结构的观察方法 ?光学显微镜技术（light microscopy） ?电子显微镜技术 (electron microscopy) ?扫描遂道显微镜 (scanning tunneling microscope ) 第二节 细胞组分的分析方法 ?离心分离技术 ?细胞内核酸、蛋白质、酶、糖与脂类等的显示方法 ?特异蛋白抗原的定位与定性 ?细胞内特异核酸的定位与定性 ?放射自显影技术 ?定量细胞化学分析技术 第三节 细胞培养、细胞工程与显微操作技术 ?细胞的培养 ?细胞工程 一、光学显微镜技术（light microscopy ?普通复式光学显微镜技术 ?荧光显微镜技术（Fluorescence Microscopy） ?激光共焦扫描显微镜技术（Laser Confocal Microscopy） ?相差显微镜（phase-contrast microscope） ?微分干涉显微镜（differential-interference microscope） ?录像增差显微镜技术（video-enhance microscopy） 二、 电子显微镜技术 ?电子显微镜的基本知识 ?电镜与光镜的比较 ?电镜与光镜光路图比较 ?电子显微镜的基本构造 ?主要电镜制样技术 ?负染色技术 ?冰冻蚀刻技术 ?超薄切片技术 ?电镜三维重构技术 ?扫描电镜（Scanning electron microscope，SEM） 三、 扫描遂道显微镜 ?原理：量子力学中的隧道效应 ?装置：扫描的压电陶瓷，逼近装置，电子学反馈控制系统和数 据采集、处理、显示系统。 ?特点：（1） 分辨本领高，（侧分辨率为0.1～0.2nm， 纵分辨率可达0.001nm）； （2）可在真空、大气、液体等多种条件下工作； （3）非破坏性测量。 ?用途：纳米生物学研究领域中的重要工具 普通复式光学显微镜技术 光镜样本制作 分辨率是指区分开两个质点间的最小距离 荧光显微镜技术（Fluorescence Microscopy） ?原理与应用 ?直接荧光标记技术 ?间接免疫荧光标记技术 ?在光镜水平用于特异蛋白质 等生物大分子的定性定位： 如绿色荧光蛋白(GFP)的应用 激光共焦扫描显微镜技术（Laser Confocal Microscopy） ?原理 ?应用： 排除焦平面以外光的干扰，增强 图像反差和提高分辨率，可重构 样品的三维结构。 ?相差显微镜（phase-contrast microscope） 可将这种光程差或相位差，转换成振幅差，可用于观察活细胞 ?微分干涉显微镜（differential-interference microscope） 偏振光经合成后，使样品中厚度上的微小区别转化成 明暗区别，增加了样品反差且具有立体感。适于研究 活细胞中较大的细胞器 ?录像增差显微镜技术（video-enhance microscopy） 计算机辅助的微分干涉显微镜可在高分辨率下研究活 细胞中的颗粒及细胞器的运动 其他显微镜 其他光学显微镜 暗视野显微镜 倒置显微镜:物镜与照明系统颠倒，前者在载物台之下，后者在载物台之上，用于观察培养的活细胞，通常具有相差物镜，有的还具有荧光装置 紫外光显微镜 电镜与光镜的比较 电镜与光镜光路图比较 电子显微镜的基本构造 主要电镜制样技术 ?超薄切片技术 用于电镜观察的样本制备示意图 ?负染色技术（Negative staining） 染色背景，衬托出样品的精细结构 ?金属投影 ?冰冻蚀刻技术（Freeze etching） （技术示意图） 冰冻断裂与蚀刻复型：主要用来观察膜断裂面 的蛋白质颗粒和膜表面结构。 快速冷冻深度蚀刻技术（quick freeze deep etching） ?电镜三维重构技术 电子显微术、电子衍射与计算机图象处理相结合 而形成的具有重要应用前景的一门新技术。 电镜三