宝生物反转说明书.doc

宝生物反转录说明书 TaKaRa Code ：DRR047A PrimeScript ? ? RT reagent Kit W ith gDNA Eraser (Perfect Real Time) （100 次量） 宝生物工程( ( 大连) ) 有限公司 说明书 目 录 内 容 页 码 ● ● 制品说明 1 1 ● ● 制品内容 1 1 ● ● 保 存 1 1 ● ● 特 长 1 1 ● ● RNA 样品制备 2 2 ● ● 使用注意 2 2 ● ● 操作方法 3 3 ● ● 实验例 7 7 ● ● 引物设计说明 9 9 ● ● 引物设计服务说明 9 9 ● ● 制品说明 为了准确地进行基因表达量分析，必须满足只有 cDNA 作为模板检出的先决条件，但 Total RNA 中常常 混有基因组 DNA，并可以直接作为 PCR 反应的模板进行扩增，因此会造成解析结果不准确。为了避免这 种情况发生，通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子上，使基因组 DNA 得不到扩增。但是，此方 法不适合具有单个外显子的基因或两个外显子之间所跨的内含子过小的基因， 同时当基因组上有伪基因存 在时、或设计引物对基因组有非特异性扩增时、以及基因信息没被完全解析的生物种等也同样不适合于本 方法。在这种情况下，我们常常需要对 Total RNA 样品进行 DNase I 处理，以除去残存的基因组 DNA。 而 DNase I 处理通常要进行复杂的纯化操作，同时会造成 RNA 的降解和损失。 PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因组DNA 进行Real Time RT-PCR反应的专 用反转录试剂。Kit 中使用了具有较强 DNA 分解活性的 gDNA Eraser，通过 42℃，2 min 即可除去基因 组 DNA。同时由于反转录试剂中含有抑制 DNA 分解酶活性的组分，经过 gDNA Eraser 处理后的样品可 以直接进行 15 min 的反转录反应合成 cDNA， 因此， 20 分钟内即可迅速完成从基因组 DNA 去除到 cDNA 合成的全过程。 使用本制品合成的cDNA适用于SYBR ? Green分析法和TaqMan ? 探针分析法，可以根据实验目的，选择与 SYBR ? Premix Ex Taq TM II （Perfect Real Time） 、 Premix Ex Taq TM （Perfect Real Time）等TaKaRa Perfect Real Time系列定量试剂组合使用。 ● ● 制品内容 （ 20 μ μl l 反应×0 100 次） 1. gDNA Eraser 100 μl 2. 5×gDNA Eraser Buffer*1 200 μl 3. PrimeScript ? RT Enzyme Mix I*2 100 μl 4. 5×PrimeScript ? Buffer 2（for Real Time）*3 400 μl 5. RT Primer Mix*4 400 μl 6. RNase Free dH 2 O 1 ml×2 本 7. EASY Dilution（for Real Time PCR）*5 1 ml *1 5×gDNA Eraser Buffer 在反转录反应前使用，请务必进行基因组 DNA 的除去反应。 *2 含有 RNase Inhibitor。 *3 含有 dNTP Mixture。 *4 含有 Oligo dT Primer 和 Random 6 mers。 *5制作标准曲线时梯度稀释cDNA或RNA标准品的稀释液。 模板DNA或RNA如果用水或TE Buffer 稀释时，由于受 Microtube 吸附作用等的影响，往往不能准确地进行稀释，导致实验结果精度降 低。使用本制品时，即使稀释至低浓度也能够进行准确地稀释，容易在宽广范围内获得准确定量 的标准曲线。EASY Dilution 也可以单独购买（TaKaRa Code：D9160） 。 EASY Dilution 请与本公司 Real Time PCR 试剂组合使用， 对于其他公司的同类制品的适用性本 公司尚未进行确认。 ● ● 保 存： -20℃。 ● ● 特 长 1． 含有去除基因组 DNA 的 gDNA Eraser，只需 2 min 即可除去基因组 DNA。 2． 只需 15 min 即可高效合成 Real Time PCR 反应用模板 cDNA， 是进行 2 Step Real Time RT-PCR 反应 的最佳试剂。 3． 反转录引物使用了 Random 6 mers 和 Oligo dT Primer 混合的 RT Primer