PCR、RT-PCR常见问题分析.ppt

PCR RT-PCR 六种Taq和MasterMix： Taq、Pfu、HotStart Taq、Taq plus、Long Taq、Taq Platinum dNTP 引物 SP6,Tn7,M13 Super RNase H- Reverse Transcriptase TA 克隆系统： pBS-T 载体、连接和克隆试剂盒 pGM-T 载体、连接和克隆试剂盒 pCF-T 、pCF-Blunt 载体、快速连接试剂盒 感受态细胞 DNA Marker：22种不同大小的分子量标准 TIANGEN相关产品 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. PCR引物设计 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 引物的重要性 引物设计是PCR成功的关键。 PCR引物设计大都通过计算机软件进行。可以直接提交模板序列到特定网页，得到设计好的引物，也可以在本地计算机上运行引物设计专业软件。 引物设计需要一定的经验，不能单纯依赖软件。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 引物设计一般原则：长度 引物的长度一般为15-30 bp，常用的是18-24 bp，但长片段扩增时，引物长度30-35 bp。 引物过短易引起错配现象。 例：一个12bp的引物在人类基因组上存在200个潜在的退火位点，而20bp的引物在人基因组上存在的退火位点只有1/400个. 较长的引物（28-35bp)，还常用来区分同源性较高的模板序列或者用于产生一些突变位点。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. S b i o. t m m u. c o m. c n 重庆升博生物科技有限公司 升博生物 专业服务 PCR常见问题分析及解决方案 重庆升博生物科技有限公司 SHENGBO BIOTECH CO., LTD. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 反应体系对PCR扩增的影响 DNA模板 纯度 蛋白、多糖、酚类等抑制PCR反应 完整性 模板降解会导致PCR扩增无产物 浓度 浓度适当 引物 设计 长度适当、避免二级结构和二聚体 合成质量 浓度 50uL体系引物加量为10-20 pmol Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 反应体系对PCR扩增的影响 反应Buffer pH、盐离子、稳定剂、增强剂 提供缓冲环境 Mg 2＋浓度 过高非特异性严重 过低无扩增产物 dNTP Mixture 浓度适当，避免反复冻融 ddH2O pH值适当，避免污染 反应Buffer pH、盐离子、稳定剂、增强剂 提供缓冲环境 Mg 2＋浓度 过高非特异性严重 过低无扩增产物 dNTP Mixture 浓度适当，避免反复冻融 ddH2O pH值适当，避免污染 反应Buffer pH、盐离子、稳定剂、增强剂 提供缓冲环境 Mg 2＋浓度 过高非特异性严重 过低无扩增产物 dNTP Mixture 浓度适当，避免反复冻融 ddH2O pH值适当，避免污染 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .N