微生物中细菌菌落总数.doc

种测定化妆品菌落总数培养基的质量比较 录入时间:2010-9-14 15:11:13 来源：现代预防医学 随着化妆品使用越来越广泛。已成为人们日常生活中的必需品。开展化妆品卫生质量监测。是保障人民健康维护消费者的利益，如使用了细菌总数超标的化妆品。会导致皮肤感染 。因此，化妆品细菌总数测定是便于判明样品被污染的程度。是对样品进行卫生学评价的重要依据 。按国家卫生部颁布《化妆品卫生规范》，卵磷脂、吐温 8 0营养琼脂培养基是用于测定化妆品菌落总数的培养基。 现在生产培养基的厂家很多，为了解不同厂家生产的卵磷脂、吐温8 0营养琼脂培养基 质量，对 4种培养基进行比较 。现将结果报告如下 。? 1 材料与方法 1.1实验菌株 大肠埃希菌 ( ATCC? 25922 )，金黄色葡萄球菌 ( ATCC 6538) 。? 1.2 培养基 卵磷脂、吐温80营养琼脂培养基分别购自杭州天和微生物试剂有限公司．北京陆桥技术有限责任公司 ．广东环凯微生物科技有限公司等3种干燥培养基，编号为1、2、3号 ，干燥培养基按产品说明书配制，均在有效期内使用。自配卵磷脂、吐温8 0营养琼脂培养基，由本实验室参照文献方法配制。其蛋白胨采用日本进口材料，自配培养基编号为4号，共4种卵磷脂、吐温 8 0营养琼脂培养基。? 1.3试剂 0.5％氯化三苯四氮唑 (TTC ) 121℃ 2 0min高压灭菌，备用。? 1.4实验方法 1.4.1菌液的准备 取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌分别接种营养肉汤管。在37 ℃培 养 1 8 ～ 2 4 h。? 1.4.2稀释培养基并接种 将培养好的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌两种肉汤管用生理盐水10倍稀释 ，从10-1到l 0-7。选用平板上菌落数在5 0～1 0 0 c f u之间的稀释度，然后取稀释好菌悬液 1ml置入无菌平 皿，倾注加入0.5％TTC的卵磷脂、吐温8 0营养琼脂，每个平板1 5-2 0ml ，每种培养基接种3个平板。待凝固后将平板翻转置 3 7 ℃培养 4 8 h取出观察结果．并以每种培养基的 3个平板菌落平均数为各检测数进行比较，试验重复5次。? 1.4.3实验室室内质量控制 ?用菌落计数方法，取大肠埃希菌肉汤培养管用生理盐水10倍稀 释，从 10-1到10-7，吸取10菌悬液1ml注入无菌平板。共接种3个平板，然后将已溶解的营养琼脂倾注平板 。混匀，待凝固置37℃培养48 h后作菌落计数，连续进行10次。将所得结果标入质量控制图。? 2?? 结 果 2.1? 4种培养基大肠埃希菌的计数比较 4种培养基对大肠埃希菌进行5次菌落计数重复试验，结果显示各种培养基的菌落大小与数量基本一致．差异无统计学意义 ( F=0.257，P0.05) 。见表 1 。? 表 1? ??4种培养基大肠埃希菌生长菌落数比较 培养基编号 细菌计数（×106cfu/ml） 1 2 3 4 5 1 8.75 6.00 6.90 8.26 6.10 2 9.73 6.40 8.43 8.96 6.23 3 9.26 6.56 7.16 8.70 6.10 4(自配) 9.660 6.16 7.20 8.80 6.96 ? ? 2.2?? 4种培养基对金黄色葡萄球菌细菌总数计数 连续进行5次实验，结果显示各种培养基的菌落大小与数量基本一致，差异无统计学意义 ( F= 0.066，P0.05 )： 见表 2 。? 表 2? ?4种培养基金黄色葡萄球菌生长菌落数比较 培养基编号 细菌计数（×106cfu/ml） 1 2 3 4 5 1 6.56 8.43 6.60 9.03 6.23 2 6.90 8.76 6.16 9.16 6.5 3 7.23 9.80 5.66 8.80 6.53 4(自配) 8.63 9.06 5.86 9.13 6.20 2.3实验室室内质量控制 连续 1 0次菌落计数，测定值在 4.3×106—9.66×106之间，平均值为6.94×106cf u／ml 。s=1.74×106cf u／ml 。1 0次测定值均在`x±2 s范 围 内 ，达到实验室内部控制标准要求。? 3?? 讨 论 实验表明，在4种不同厂家生产的卵磷脂、吐温 80营养琼脂培养基上，大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的生长速度、菌落形态与数量无明显差别 ，各种培养基的软硬度、pH值等理化指标符合质量要求，差异无统计学意义。但在透明度上自配的卵磷脂、吐温80营养琼脂培养基较其他3种干燥培养基清晰透明，而3种干燥培养基配制的平板较混浊可能是由于培养基的原材料不同的关系。自配培养基用的是日本进口蛋白胨，其颜色偏浅 。蛋白胨是由蛋白质 (如酪蛋白、纤维蛋白)经酶或酸碱分解而成