鸡蛋清蛋白酶解物中抗氧化多肽的纯化与特性描述素材.doc

《》,? 鸡蛋清蛋白酶解物中抗氧化多肽的纯化与特性描述 吴健平（笔者） 摘 要 蛋白被认为是一个富含优质蛋白质与各种小分子生物活性肽片段，酶解蛋白法用来释放蛋白中不同的生物活性的小分子肽，这取决于不同的酶在释放这些生物活性肽时有不同的酶活力。在这项研究中,测定了几种蛋白酶从鸡蛋白中释放抗氧化肽的能力，蛋白酶P是根据抗氧化活性和粗蛋白水解物的消化率而选择。结合几个净化步骤包括与低分子量截止膜超滤阳离子交换色谱和反相高效液相色谱法等用于净化蛋白酶P的水解产物，来自卵白蛋白的16个抗氧化肽,卵转铁蛋白和半胱氨酸蛋白酶抑制物与有效部位是相隔离的。这些多肽的氨基酸序列的测定使用LC- MS，短链多肽的自由基吸收能力(ORAC)值用来决定合成多肽。两个肽AEERYP 和DEDTQAMP(Ala-Glu-Glu-Arg-Tyr-Pro和Asp-Glu-Asp-Thr-Gln-Ala-Met-Pro)显示ORAC值最高。这项研究的结果表明,鸡蛋清蛋白富含抗氧化肽，使用酶解纯化技术可将鸡蛋清蛋白作为制备生物活性成分的潜在来源。 关键词：鸡蛋白；酶解；超滤作用；层析分离；抗氧化肽 1.背景介绍 食源性的生物活性化合物,如生物活性肽,ω- 3脂肪酸,类黄酮、酚类化合物等,是一项主要集中在食品科学领域和营养科学领域的研究。这些化合物具有抗高血压、抗氧化,抗炎,抗菌,和其他生物相关活动可能人类健康和(刘,2004;锅。赖,Dushenkov Ho 2009;,2006)。因为氧化应激相关的各种慢性疾病的发生和发展,尽管生理上控制自由基的生产许多信号通路和正常功能是自由基的形成之间的不平衡和内源性抗氧化系统将诱导氧化损伤生物分子此外,抗氧化剂被认为扮演一个角色在预防或延迟自氧化食物广泛应用于不同的商品(Shahidi 钟,2010)。植物抗氧化肽,由于其营养价值和可能的功能性质,如乳化和起泡,相比于植物化学的抗氧化剂存在额外的优势由于其营养价值和可能的功能性质,如乳化和起泡,相比于植物化学的抗氧化剂存在额外的优势(谢,黄、徐金,2008)。抗氧化肽已报告(Chen村,山内, Nokihara 1996;Moure Dominguez, Parajo,2006),一般来说,一或几受到一系列的净化措施和生物活性分离有效的生物活性肽。(YAEETYPIL和萨拉姆)(Davalos et al .,产生更强的抗氧化肽,必须使用合适的蛋白酶水解蛋白的蛋白质。我们准备蛋白玉米胚芽蛋白酶解物显示较低的抗氧化活性比由胃肠蛋白酶(你和吴,2011)。此外,许多肽没有特点。因此,研究的目标是确定适当的蛋白酶蛋清蛋白水解物,进一步净化和描述抗氧化肽。 2.3.1.超滤过滤 P蛋白酶水解液通过超滤分离，使用膜和分子量切断(MWCO)3000 道尔顿(美国微孔).渗透、冻干用于进一步净化。 2.3.2.阳离子交换色谱法 渗透(3 千道尔顿)溶解在o.o1M乙酸铵缓冲，保持100毫克/毫升的浓度和从0.2μm过滤器和在阳离子交换柱(16 * 100毫米,HiPrep 16/10 SP FF,通用电气医疗集团) 中进行阳离子交换色谱分析高效液相色谱肽分数显示最高的抗氧化活性阳离子交换层析进一步纯化后用反相高效液相色谱法高效液相色谱在Xbridge C18柱(10 * 150毫米,5μm) 配备了2702 thermoautosampler在水里有0.05%的组织作为流动相,20PBS 在以下梯度的80%乙腈流量是3毫升/分钟在。抗氧化试验根据方法或Hampsch-Woodill和之前(2001)四种不同的样本准备75mM磷酸盐缓冲剂与50μl荧光素混合并在37℃孵化荧光每隔1分钟为99分钟的激发发射485 - 538纳米所有每个样本曲线下的面积(AUC)通过集成荧光曲线回归方程Trolox和样本值的计算是通过在同一试验样本斜率比Trolox斜率获得的。最后值表示为微克分子Trolox每毫克当量。’-)通过抗氧化化合物和的方法进行和四个不同的样使用。100μl ABTS+稀释液进行反应(absorbance~0.7 at 734nm )。37℃孵化8分钟734 nm处吸光度（spectramax 190,Molecular Devices Corporation,CA)绘制出样本曲线。标准曲线是一系列浓度的混合Trolox(0、2、4、8、12、16和20μm)100μlABTS+稀释液而得出。值计算的基础trolox曲线表达为表示为微克分子Trolox每毫克当量。 抗氧化活性在第二次高效液相色谱净化C18墨盒根据描述的方法使用系统连接进行分析有哪些信誉好的足球投注网站引擎有哪些信誉好的足球投注网站引擎结合使用手册从头测序处理MS / M