基因扩增(PCR)实验室素材.doc

基因扩增（PCR）实验室 辽阳鑫宇实验室设备安装工程有限公司技术部 前 言 基因扩增检验实验室一文，是根据国家有关法律、法规和技术规范，进行选编、择录和收集有关资料、文章而编写的。选编和择录有关技术规范等，如有错误是编著人理解有误，编者表示歉意。 本文的平面图由黄海江、效果图赵玉、录入周悦同志完成。 柏松枫、何兴福、张璐、张伟卓、赵馨、赵俨、熊洁萌等编写。陈洪柱参与校对。 总经理郎宪明（高级工程师）编导。 本文为内部参阅资料，仅供参考。 2015年2月 基因扩增（PCR）实验室 基因扩增检验方法（简称PCR）灵敏度高、特异性强、精确快捷、适用范围广等特点。在生物学、医学科学研究、转基因产品、临床检测、疾病与动物疫病预防和控制、公安侦查等相关专业和学科广为应用。但是，PCR检验实验室应用时需保证实验安全、设置合理的实验室、规范的操作程序和严格的管理制度。 近几年，对PCR实验室建设越来越得到重视，因为对检测结果的可靠性、准确性和安全性起到至关重要作用，PCR实验室设计核心问题是如何避免污染。实验室的平面布局、空调通风系统运行、气流控制等都是围绕防止污染这个核心进行设计和建设。 1. PCR实验室组合形式 PCR实验室可以是分散形式，也可以是组合形式，现在主要是以组合形式为主。 1.1 分散形式PCR实验室 各功能区间分散，又有一定的间距，不会造成区间干扰，因此没有特定要求。由于工作流程的不便利，在新组建的PCR实验室时往往不被采用。 1.2 组合形式PCR实验室 在较大空间实验用房相邻布置依次划分各功能区域，形成一个组合形式完成基因扩增分析的PCR实验室，各区间在物理空间上完全相互独立，各区间无论是在空间还是在使用中，始终处于完全的分隔状态。但是，各实验区间集中布置，容易造成相互干扰，因此对总体布局以及屏障系统具有一定要求。对实验室的空调通风系统、气流流向、大气压力、人物流程等方面，在实验室设计和装修上需进行合理考虑。 2. PCR实验室的区域设计 2.1 PCR实验室分区 PCR实验室可分两个工作区域：核酸扩增前区和核酸扩增后区。核酸扩增前区包括试剂准备区和样品处理区，设在不同房间或区域；核酸扩增后区包括扩增区和产物分析区，设在不同房间或区域。 2.1.1 PCR实验室根据使用仪器的功能合理设置各个区域，如采用聚合酶联反应：则设置试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区四个单独的工作区域。样品需要粉碎处理的，还需增设样品粉碎区；若使用实时荧光PCR法：基因扩增区、基因产物分析区可以合并；采用标本处理、核酸提取及扩增检测为一体的全自动化PCR分析仪，则标本制备区、扩增区、扩增产物分析区可合并为一个区域，因此PCR实验室原则上设置五个区或四个区或三个区或二个单独的工作区。 2.1.2 核酸扩增前区和核酸扩增后区可设在一个房间内，但必须在满足下列要求的前提下： 核酸扩增前区实验室内设置两个不同位置的实验区，试剂配置在超净工作台中操作，样品处理在生物安全柜内操作。 在核酸扩增后区使用全封闭的扩增和检测系统时，如实时荧光PCR仪等。 每个实验人员使用各自的试剂、耗材、移液器和盛放污染物的盛器。 在实验前后对操作区域和共享器具进行清洁及消毒。 各区域的试剂、器具、仪器和设备为该区专用，不得交叉使用。 2.2 PCR实验室各区域功能： 2.2.1 试剂储存和准备区：扩增试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的制备以及离心管、吸头等消耗品的储存和准备。 2.2.2 标本制备区：样品登记、处理和分装；核酸（RNA/DNA）提取、保存和使用；PCR扩增的第一轮加样。对于涉及样本的操作应符合生物安全二级实验室防护标准或更高。 2.2.3 基因扩增区：cDNA合成和DNA扩增。如果在此区进行套式PCR的第二轮加样，应在PCR防护罩内进行。 2.2.4 扩增产物分析区：扩增产物的电泳、杂交、成像、序列测定、变性高效液相分析、结果分析、登记及报告。 2.3 工作区域设备和仪器的配置。 2.3.1 试剂储存和准备区 2-8℃和-20℃以下的冰箱、普通离心机、超净工作台、混匀器、微量加样器（覆盖0.2-1000μL），消耗品（一次性手套、耐高压处理的离心管和加样吸头）、专用工作服工作鞋（套）、专用办公用品和废弃物容器、可移动紫外线灯。 2.3.2 标本制备区 2-8℃冰箱、-20℃（或-80℃）冰箱，生物安全柜、高速制冷离心机（台式）、混匀器、恒温水浴箱或加热模块、制冰器或制冷模块、微量加样器、消耗品（