62《基因工程及其应用》.ppt

知识回顾 1、基因工程的定义： 是指在______通过人工______和______等方法，对生物的______进行改造和重新组合，然后导入_____细胞并使重组基因在其中_____，产生人类需要的基因产物的技术。又称为__________技术 2、基因工程的工具： 获取某个目的基因后，是否就只用这一个目的基因进行基因工程的操作？为什么？ 基因工程概述（小结） 基因工程的诞生和发展 1973年，科恩 三个时期 基因工程的工具 限制性核酸内切酶、DNA连接酶 载体（质粒、噬菌体、动植物病毒） 基因工程的一般过程与技术 基因工程概述补充 1、DNA连接酶：连接游离的DNA片段 补：真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 能够编码蛋白质的序列叫做外显子 不能够编码蛋白质的序列叫做内含子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 内含子： 外显子： * * * 体外 剪切 拼接 基因 受体 表达 酶和载体 DNA重组 大肠杆菌细胞 基因工程的工具——载体（分子运输车） 根据书12页第一自然段，回答下列问题： 1、载体的作用？ 2、载体的种类有哪些？ 3、质粒来源于什么细胞，它的本质是什么？ 将外源基因导入受体细胞 质粒、噬菌体、动植物病毒 拟核 质粒 （小型环状DNA） 青霉素抗性基因 酶切位点 基因工程的工具——载体（分子运输车） 请思考讨论回答： 1、载体上为何需要有一个或多个限制性内切酶切割位点？ 2、含有该质粒的细菌在青霉素培养液中能否生存？青霉素抗性基因存在于质粒中的意义？ 总结：作为载体必须具备的条件： 1、有一个或多个酶切位点 2、有标记基因 3、能自我复制 4、对受体细胞无害等 基因工程的工具——载体（分子运输车） 质粒 DNA分子 限制性核酸内切酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同一种 基因工程的一般过程与技术 基因工程成功的关键：制备重组DNA 创新10 基因工程的一般过程与技术 认真阅读书12页图1-4基因工程的一般过程，讨论下列问题： 1、为何要用同一种限制性核酸内切酶切割质粒和目的基因？ 2、请总结“转化”的定义。 3、为何要进行筛选？举例说明如何筛选？ 4、基因工程的最终目的是获得什么？ 基因工程的一般过程与技术 说出基因工程的基本过程： 获得目的基因 制备重组DNA分子 转化受体细胞 筛选出获得目的基因的受体细胞 培养受体细胞并诱导目的基因的表达 认真阅读13页图1-6，同桌间讨论： 1、目的基因是什么？受体细胞是什么？ 2、该番茄如何抗氧化？基因表达产物是什么？ 3、土壤农杆菌在其中可能起什么作用？ 基因工程的一般过程与技术 PCR仪 运用PCR技术，可以将目的基因扩增百万倍以上 获得目的基因、 制备重组DNA分子、 转化受体细胞 筛选出获得目的基因的受体细胞 培养受体细胞并诱导目的基因的表达 CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAA AATTCCGTAG 2、DNA聚合酶与RNA聚合酶：连接单个核苷酸 A G T A C A A A T A G C U G A C G G U U U RNA 聚合酶 A G T A C A A A T A G C G A C G G U U U U A G T A C A A A T A G C G A C G G U U U U A G T A C A A A T G C G A C G G U U U U A A G T A C A A A T G C G A C G U U G U U A A G T A C A A A T G C G A C G U G U U A U A G T A C A A A T G C G A C G G U U A U U A G T A C A A A T G C G A C G G U U A U U A A G T A C A A A T G C G C G G U U A U U A U A G T A C A A A T G G C G G U U A U U A U C A G T A C A A A T G G C G G U U A U U A U C RNA DNA DNA复制 1、从基因文库中获取 将含