色谱法-LC-SFC-CE.ppt

高效液相色谱法 LC的特点（与GC比较） LC仪器基本结构 LC的各种固定相及流动相 多种LC模式的原理、适用对象 4.1 高效液相色谱特点 HPLC与GC比较 对象 GC：气体和低沸点化合物，有机物总数20％ HPLC：高沸点、热不稳定、大分子，80％ 流动相 GC：惰性气体，不与组分作用。 HPLC：H = A + Cu。与固定相竞争作用。是改进分离的重要操作条件。 操作温度 GC：高；程序升温。 HPLC：常温；恒温。 一、高压输液系统 HPLC最重要部件 储液罐+过滤器+高压输液泵+压力脉动阻尼器等 高压输液泵：流量、压力平稳，可调范围宽。 恒流泵或恒压泵 恒压泵 保留时间重现性差。 恒流泵 机械注射泵+机械往复泵。 应用最多的是机械往复泵。 邻苯二甲酸二酯的分离 二、进样系统 防止柱外效应（进样系统、连接管道及检测器等处）。 三、分离系统—色谱柱 柱管+固定相 柱管材料：玻璃、不锈钢……。 一般柱长5～30cm，内径4～5mm。 四、检测系统 紫外检测器 荧光检测器 示差折光率检测器 电导检测器 …… 检测方法特点 五、附属系统 恒温、脱气、自动进样、馏分收集以及数据处理等装置。 4.3 固定相和流动相 一、 HPLC固定相 键合固定相的选择 二、流动相 又称淋洗液，洗脱剂，是改善分离的最直接手段。 要求： 合适极性、选择性 与检测器匹配 紫外吸收检测器，溶剂的紫外截止波长。 折光率检测器，折光率差别大。 高纯度 基线。痕量杂质将使截止波长值增加50～I00nm，“伪峰” 。 化学稳定性好 不与样品发生反应。 低粘度 压力。粘度过低易形成气泡。 流动相极性 4.4 HPLC主要类型 正相~反相色谱 流动相和固定相的极性 正相色谱 极性：流动相(正己烷、氯仿) 固定相 (硅胶或键合CN、NH2、羟基) 洗脱顺序：极性↑，tR↑ 反相色谱 极性：流动相(水/甲醇/乙腈/缓冲液) 固定相(C4、 C8、 C18、 C6H5) 洗脱顺序：极性↑，tR↓ 溶剂强度系数 三、离子交换色谱 IEC原理 [A]r、[B]r：树脂相中洗脱剂离子A和样品B的浓度，[A]、[B]：溶液中的浓度。 KB/A：选择性系数，B对于A型树脂亲和力的大小。 KB/A 电荷越多，水合离子半径越小，KB/A越大。 磺酸型： Cs+＞Rb+＞K+＞NH4+＞Na+＞H+＞Li+ Ba2+＞Pb2+＞Sr2+＞Ca2+＞Cd2+＞Cu2+，Zn2+＞Mg2+ 季铵盐型： ClO4-＞I-＞HS04-＞SCN-＞NO2-＞Br-＞CN-＞Cl-＞BrO3-＞OH-＞HCO3-＞H2P04-＞IO3-＞CH3COO-＞F- 离子交换树脂 多孔型 聚(苯乙烯~二乙烯基苯)，5～20μm。 表面多孔型 惰性核+微球硅胶层+交换树脂。 薄壳型 直径约30μm的固体情性核+1～2μm树脂层。 键合型 键合薄壳型 薄壳玻珠载体 键合微粒载体型 多孔微粒硅胶载体。机械性能稳定。 小粒度+高压→快速分离。 官能团 流动相 pH、离子强度 阴离子滞留次序：柠檬酸离子＞SO42－＞C2O42-＞I-＞NO3-＞CrO42-＞Br-＞SCN-＞ Cl-＞HCOO-＞CH3C00-＞OH-＞F-。柠檬酸离子洗脱要比用氟离子快。 阳离子的滞留次序：Ba2+＞Pb2+＞Ca2+＞Ni2+＞Cd2+＞Cu2+＞Co2+＞Zn2+＞Mg＞ Ag+＞Cs+＞Rb+＞K+＞NH4+＞Na+＞H+＞Li+。差别不如阴离子明显。 样品电离度增大，保留增大。 四、离子色谱 离子色谱法特点 本底电导抑制 抑制柱：高容量离子交换剂。 非抑制型离子色谱 离子色谱的应用 五、离子对色谱 反相离子对色谱 SEC固定相 七、亲和色谱法 八、制备型液相色谱 柱容量(负荷) 九、分离类型的选择 十、HPLC的应用 其他分离分析技术 超临界流体色谱法 流体性能、色谱原理、特点（与GC、LC比较）、仪器、操作条件、检测器及应用。 毛细管电泳 原理、分离模式、仪器结构及应用。 部分超临界流体 流动相-固定相 SFC仪器结构 主要部件 压力效应 分子量-色谱法应用范围 5.2 毛细管电泳 5.2.1 CE基本原理 一、电泳 二、电渗与电渗流 CE中的EOF 电渗流的流形 EOF在CE中的作用 影响电渗流的因素 三、区带展宽 四、有关参数 分离度 五、主要仪器部件 六、CE进样方式 5.2.2 CE分离模式 1、毛细管区带电泳 2、毛细管凝胶电泳 3、胶束电动毛细管色谱 4、毛细管电色谱 5、毛细管等电聚焦 6、毛细管等速电泳 5.2.3 CE的应用与进展 一、离子分析 二、其他应用 分离分析法重点 术语，塔板理论，速率理论，总分离效能指标，色谱分离基本方程式； 气相色谱：分离条件、固定相、定性（保留值、保留指