革兰阳性球菌_培训课件.ppt

细菌学检验 肺炎链球菌检验程序 脓液 血液 脑脊液 痰 临床标本 标 本 采 集 最好在用药前采集标本 器皿应清洁无菌，采集标本时避免污染，尽快送检。 自肺部咳出的痰，应选择铁锈色或脓性分泌物部分送检。 诊断菌血症、败血症、采血时应选择在寒战、高热时。采血量应在5-10ml。 检查方法和结果 印度墨汁法：将待鉴定菌株，接种兔血清肉汤中，37℃培养24h，取一环培养物滴于载玻片一端，另取一环福尔马林印度墨汁，与菌液混合，推成薄片，自然干燥，火焰固定，再滴加石碳酸复红染液，染色30min，吸去多余液体，使其干燥。油镜镜检。 荚 膜 染 色 背景呈黑色，菌体染成红色，其周围有一较宽的无色透明带，即荚膜。 检查方法和结果 荚膜肿胀试验（capsule swelling test） 亦称为Quellung试验。新鲜的标本悬液与等量不稀释的肺炎球菌分型诊断血清混合后，进行荚膜染色，镜下观察。标本中肺炎球菌若与同型免疫血清相遇，荚膜将显著增大。 可快速诊断肺炎链球菌。 荚 膜 肿 胀 试 验 检查方法和结果 原理：一方面由于胆汁或去氧胆酸钠降低了细菌细胞膜上的表面张力，使细菌的细胞膜破损或使菌体裂解，另一方面可能与激活细菌体内的自溶酶有关。 方法：①试管法 ②平板法 结果：①试管法：在3h内液体透明为阳性。 ②平板法：如菌落消失，仅留下溶血区为阳性，菌落不消失为阴性。 检查方法和结果 胆汁溶菌试验? 肺炎链球菌胆盐溶菌阳性（澄清、透明） 右侧为草绿色链球菌胆盐溶菌阴性对照，混浊 * 红色字体为重点，要求掌握；带颜色为熟悉；黑色为了解。 * * 原理 通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。 * 在血平板上，金黄色葡萄球菌为金黄色，不透明圆形菌落，在菌落周围有明显的透明溶血环。 * 金黄色葡萄球菌能产生大量核酸酶，该酶可耐受100℃ 30min 不被破坏，降解DNA和RNA的能力较强。 * 抗原30余种，本质为细菌表面成分。 * 凝固酶可使血浆纤维蛋白包被在菌体表面，妨碍吞噬细胞的吞噬或胞内消化作用，还能保护细菌免受血清杀菌物质的作用。同时病灶周围有纤维蛋白的凝固和沉积，使细菌不易向外扩散，故葡萄球菌感染易于局限化。 透明质酸酶：降解结缔组织（扩散因子） 脂酶：分解脂肪 触酶：分解H2O2 * * * 革兰染色阳性，呈葡萄状排列的球菌，即可作初步报告。 * * 国标分离金黄色葡萄球菌通常采用血平板、Baird-Parker培养基 。 * 在临床检验中，常遇到血浆凝固酶阴性的葡萄球菌，不能轻率作出非致病性葡萄球菌或污染菌的结论。因血浆凝固酶阴性的葡萄球菌也可引起菌血症、尿路感染和心内膜炎等 * 2．。 * 注意事项　　1．因红细胞内含有触酶，会出现假阳性反应，故触酶试验不宜用血琼脂平板上的菌落；此外，陈旧培养物可丢失触酶活性，而出现假阴性反应。因此每次做触酶试验一定要用阳性菌株和阴性菌株作对照。阳性对照可用金黄色葡萄球菌，阴性对照可用链球菌。　　 * * 多为条件致病菌 * 致病性最强 * 一般不致病 * 可产生自溶酶 * 菌血症是细菌入血，无大量繁殖，无释放细菌毒素。 败血症是细菌入血，并大量繁殖，释放毒素。 脓毒血症是有化脓细菌引起的败血症。 毒血症是内源性或外源性的毒素进入血中 1.4.2 致病性葡萄球菌的鉴定依据 1. 产生脂溶性金黄色色素 2. 血平板上菌落周围产生透明溶血环 3. 发酵甘露醇 4. 血浆凝固酶阳性 5. 耐热核酸酶阳性 6. 涂片镜检为革兰阳性葡萄状排列的球菌 7. G+Cmol%为30mol %—38mol % 1.4.3 注意事项 1. 污染的脓汁及粪便标本应接种高盐甘露醇琼脂平板，取分解甘露醇呈淡黄色的菌落进行鉴定。 2. 如为脑脊液或深部闭合性伤口标本，当常规培养阴性时，应考虑厌氧培养。 3. 药物治疗后，金黄色葡萄球菌易产生耐药性变异，同时也可出现生化反应、菌落特征、致病力、色素、溶血性等的变异。 4. 注意与粪链球菌及小球菌科其他菌的鉴别。 1.5 防治原则 治 抗菌素 药敏试验 自身菌苗 疗法 防 注意 消毒隔离 防止医源