细菌超广谱β内酰胺酶与耐药性_培训课件.ppt

4、分子生物学检测 聚合酶链式反应(PCR) 参照 GenBank 已发表的 TEM、SHV、CTX-M 和 OXA 各亚型的基因序列，分别设计特异性引物 5、总结ESBLs的检测方法 表型初筛试验 初步判断 表型确证试验 最终确认 三相水解试验 确认菌株是否只产ESBLs E-test 法 分子生物学检测 （四）ESBLs 的防治 (1)开发能够相对或绝对能够抵抗β－内酰胺酶水解的新型抗菌药物。 (2)应用β-内酰胺酶抑制剂 (3)规范抗生素的使用 （一）β-内酰胺酶抑制剂 β-内酰胺酶抑制剂是一种β-内酰胺类药物，可与β-内酰胺酶发生牢固的结合而使酶失活，和其他抗生素联用可增强抗菌活性，减少其用量。 （二）β-内酰胺酶抑制剂分类 按作用分为三类： （1）可逆性竞争性抑制剂：邻氯西林、双氯西林等 （2）不可逆竞争性抑制剂：克拉维酸、舒巴坦等 （3）非竞争性抑制剂：甲氧西林等 β-内酰胺酶 β-内酰胺类抗生素 β-内酰胺酶 克拉维酸 不可逆竞争性抑制 药物分解，细菌存活 酶失活，药物起作用 β-内酰胺酶 邻氯西林 + 邻氯西林 可逆性竞争性抑制 (三)合理使用抗生素 有报道显示抗生素尤其是第三代头孢菌素的应用与 ESBLs 的感染流行有关。 敏感菌因抗生素的选择性压力而被大量杀灭后，耐药菌得以大量繁殖而成为优势菌，同时抗生素的选择性压力也加快了细菌突变的速度。 因此合理使用抗生素并采取有效的消毒隔离措施，才是预防ESBLs 产生的最好方法。 细菌ESBL酶与耐药性 主讲人：华耀 细菌超广谱β－内酰胺酶与耐药性 1、什么是β－内酰胺类抗生素？ 2、什么是β－内酰胺酶？ 3、什么是超广谱β－内酰胺酶？ 4、它们与细菌耐药有什么关系？ 一、β－内酰胺类抗生素 青霉素发现者、英国科学家弗莱明（1928） （一）概念 β-内酰胺类抗生素（β-lactams）指化学结构中具有β-内酰胺环的一大类抗生素。 (二) β－内酰胺类抗生素抑制细菌的机理 N-乙酰葡萄糖胺 双糖十肽 转肽酶 N-乙酰胞壁酸五肽 聚合物 （PBPs） 粘肽（构成细胞壁） β－内酰胺类抗生素 （－） 胞浆内 细胞膜 细胞膜外 细胞壁合成受阻，细胞壁缺损，外环境水分渗入到菌体，菌体膨胀裂解而死。 二、β－内酰胺酶 （一）概念 β-内酰胺酶（β-lactamase）是细菌产生的可水解β-内酰胺类抗生素的酶。 绝大多数常见的β-内酰胺酶有一个依赖丝氨酸发挥作用的机制。通常它们的活性位点具有一个狭窄的纵形沟状结构，在沟的底部形成了一个空腔（氧阴离子袋），这种疏松的构造容易弯曲，便于结合底物。 （二）、β-内酰胺酶是细菌耐药的机理 丝氨酸的结构式 β-内酰胺环上的羰基碳在结合β内酰胺酶活性部位的丝氨酸时发生了不可逆的反应，结果使其成为开环物。 （三）β-内酰胺酶分类方法 一、Bush-M-J分类法（功能分类法） 根据β-内酰胺酶的功能相似性（底物和抑制物的轮廓）分为1 ，2 ，3 ，4 四组，其中2组和3组又分为很多亚组。 二、Ambler分类法（分子分类法） 根据酶的氨基酸序列的保守性和相似性将β-内酰胺酶分为A，B，C，D四组。 克拉维酸 三、超广谱β- 内酰胺酶 （一）概念 超广谱β- 内酰胺酶(extended spectrum beta - lactamases , ESBLs) 是由质粒介导的能赋予细菌对多种β- 内酰胺类抗生素和单酰胺环类抗生素耐药并可被 β-内酰胺酶抑制剂所抑制的一类 β-内酰胺酶. (二)超广谱β- 内酰胺酶特点 （1）主要是有质粒介导 ESBLs 基因由质粒介导, 可通过接合、转化和转导等形式在细菌间扩散。 （2）产超广谱β- 内酰胺酶主要是革兰氏阴性菌 如：大肠埃希菌属、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌 （3）能被β- 内酰胺酶抑制剂所抑制 如：CA（克拉维酸）、甲氧西林 （1）TEM型 ESBLs TEM 型 ESBLs 由 TEM- 1 衍化而来。在 TEM 家族中 TEM- 3 是第一个显示 ESBLs 特点的 TEM 型 β- 内酰胺酶。TEM 型 ESBLs 的形成是因为238位甘氨酸突变为丝氨酸所形成的。这种突变提高了对头