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实验5粗蛋白质的测定
实验五：粗蛋白含量的测定（微量凯氏定氮法） 1．实验原理 样品与浓硫酸、催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。然后加碱蒸馏，使氨蒸出，用硼酸吸收后再以标准盐酸或硫酸溶液滴定。根据标准酸消耗量可计算出蛋白质的含量。 消化：NH2(CH2)2COOH+3H2SO4→2CO2+3SO2+4H2O+NH3 2NH3+H2SO4 →(NH4)2SO4 蒸馏：(NH4)2SO4 +2NaOH→2H2O+Na2SO4+2NH3 吸收：NH3+4H3BO3 →NH4HB4O7+5H2O 滴定：NH4HB4O7+HCl+5H2O →NH4Cl+4H3BO3 2. 实验材料、仪器与试剂 材料：豆奶粉 仪器：消化炉，100mL容量瓶，微量凯氏定氮蒸馏器，125mL三角瓶，酸性滴定管，移液管。 试剂：浓硫酸，硫酸铜，硫酸钾，40%氢氧化钠，2%硼酸溶液，0.1mol/L盐酸溶液，溴甲酚绿—甲基红混合指示剂。 3. 实验步骤 （1）消化： 准确称取豆奶粉样品0.5g左右，置于消化管中，加入6g硫酸钾、0.2g硫酸铜，再加20mL浓硫酸摇匀，待剧烈反应结束后，在消化炉上消化，待溶液澄清透明后再消化30min，然后将消化液无损地转移到100mL容量瓶中，定容。 样品0.5g 0.2g硫酸铜 6g硫酸钾 20mL浓硫酸 （2）蒸馏、吸收与滴定：装好微量定氮装置，准确移取消化稀释液5mL于反应管内，经漏斗再加入10mL40%氢氧化钠溶液，用少量蒸馏水洗漏斗数次，夹好漏斗夹，进行水蒸汽蒸馏。冷凝管下端预先插入盛有10mL 2%硼酸吸收液的液面下。蒸馏至吸收液中所加的混合指示剂变为绿色开始计时，继续蒸馏5min后，将冷凝管尖端提离液面再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管尖端后停止蒸馏。然后用0.01mol/L盐酸滴定吸收液。 微量凯氏定氮蒸馏装置 （凯氏） 4. 结果计算 摇匀 小火炭化至 泡沫完全停止 大火加热 保持液体微沸 消化液蓝绿色并澄清透明，继续消化0.5h 冷却后定容至100mL 半微量凯氏定氮蒸馏装置 （马氏）
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