实验四 酶活性影响因素的测定－温度pH对酶活性的影响.ppt

3.pH值对酶活力的影响 　　取8支10毫升刻度试管,编号。按下表中的比例,用取样器添加 0.2M 磷酸氢二钠溶液和 0.1M 柠檬酸溶液,制备PH5.0-8.0的8种缓冲溶液. 以1分钟的间隔,依次向第1至第8号试管中加入稀释50-100倍的唾液2毫升,摇匀,并以1分钟的间隔依次将8支试管放入37℃恒温水浴中保温.然后,按照第9 号试管的保温时间,依次将各管迅速取出,并立即加入碘化钾-碘溶液2滴,充分摇匀.观察各管呈现的颜色,判断在不同pH值下淀粉被水解的程度,可以看出PH对唾液淀粉酶活性的影响,并确定其最适pH. 下次实验 蛋白质的颜色和沉淀反应 * 酶实验 实验四 酶活性影响因素的测定 －温度、pH对酶活性的影响 基本原理 酶是生物体内具有催化功能的蛋白质，也叫生物催化剂。生物体内存在多种多样的酶，从而使生物体在温和的条件下能够迅速完成复杂的代谢过程。 　　酶活力受环境PH值的影响极为显著。通常各种酶只有在一定的PH值范围内才表现出活力。一种酶表现活力最高时的pH值，称为该酶的最适pH。低于或高于最适pH时，酶的活力均逐渐降低。不同酶的最适pH也不同。酶的最适pH也受底物性质和缓冲液性质的影响。 　　酶的催化作用受温度的影响亦很大。在一定温度范围内，随着温度的升高，酶的热变性不显著，而酶促反应速度增加，直至达到最大值。反应速度达到最大值时的温度称为酶作用的最适温度。当温度超过酶的最适温度时，酶促反应急剧下降，直至完全停止。一种酶的最适温度不是完全固定的，它与作用的时间长短有关，一般作用时间长，最适温度低，而作用时间短，则最适温度高。大多数动物酶的最适温度为37-40℃，植物酶的最适温度为40-60℃。 　　本实验分别以不同温度及不同pH条件下让淀粉酶作用于淀粉，并用碘液检查酶促淀粉的水解程度，来说明温度及pH对酶活力的影响。 　　实验中以稀释的唾液作为淀粉酶液。唾液内的淀粉酶可将淀粉逐步水解成各种不同大小的糊精分子，最终产物为麦芽糖和少量的葡萄糖。它们遇碘呈不同的颜色。直链淀粉（即可溶性淀粉）遇碘呈蓝色；糊精按分子从大到小的顺序，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色和红色，最小的糊精和麦芽糖遇碘不显颜色。由于在不同温度，不同pH条件下唾液淀粉酶的活性高低不同，则淀粉被水解的程度不同，所以，可由酶反应混合物遇碘所呈现的颜色来判断上述诸因素对酶活性的影响。 操作步骤 2. 温度对酶活力的影响 取3支试管，编号后各加入淀粉溶液2毫升。将第1，2号试管放入37℃恒温水浴中保温，第3号试管放入冰水中冷却，5分钟后，向第1号试管中加入煮沸5－15分钟的稀释唾液1毫升，向第2，3号试管加稀释唾液各1毫升。摇匀，20分钟后取出3支试管，各加碘化钾－碘溶液2滴，混匀，比较各管溶液的颜色。判断淀粉被唾液酶水解的程度，并说明温度对唾液酶活性的影响。 1.稀释的新鲜唾液： 取唾液适量，量取一定体积，用蒸馏水稀释20倍。 5.0 5.6 6.0 6.4 6.8 7.2 7.6 8.0 4.85 4.20 3.69 3.08 2.28 1.31 0.64 0.28 5.15 5.80 6.31 6.92 7.72 8.69 9.36 9.72 1 2 3 4 5 6 7 8 缓冲液PH 0.1M柠檬酸(毫升) 0.2M磷酸氢二钠(毫升) 试管号 取9支干燥的试管,编号.将8支刻度试管中不同pH的缓冲液各取3毫升,分别加入相应的号码(1-8号)的试管中.然后,再向每个试管中添加0.5％淀粉溶液2毫升.第9号试管与第5号试管的内容物相同. 向第9号试管中加入50-100倍的唾液2毫升,摇匀后放入37℃恒温水浴中保温. 每隔1分钟由第9号试管中取出1滴混合液,置于白瓷板上,加1滴碘化钾-碘溶液,检验淀粉的水解程度,待结果呈橙黄色时,取出试管,记录保温时间. 　　注意：掌握第9号试管的水解程度是本实验成败的关键之一. 思考题：将乳清蛋白、淀粉、胃蛋白酶、唾液淀粉酶和适量水混合装入一个容器内，调整pH至2.0 ，保存于37℃的水溶锅中，过一段时间后，容器内剩余的物质是什么？为什么？