犬猫弓形虫病的诊断及防控_培训课件.pptVIP

犬猫弓形虫病的诊断及防控 主要内容 弓形虫病概述 弓形虫病的实验室诊断 犬猫弓形虫防治 刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)简称弓形虫。属于孢子虫纲、真球虫目、弓形虫科。因其虫体呈弓形，故命名为刚地弓形虫。在弓形虫生活史中有五个不同形态阶段即速殖子、包囊、裂殖体、配子体和卵囊，其中对人体具致病或传染性的阶段为速殖子、包囊和卵囊。 弓形虫病概述 弓形虫病(Toxoplasmosis) 是由刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)感染而引起的一种呈世界性分布且严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病。 犬猫可以感染并传播弓形虫病，随着家养宠物逐渐增多，人与宠物密切接触，人群弓形虫的感染率亦逐年上升。全球估计约有三分之一的人口感染，中国（2004年）人群平均感染率亦达到7.88%。 弓形虫的生活史 弓形虫的整个生活史发育需要经过2个宿主,猫科动物为终末宿主，人和其他动物为中间宿主。 弓形虫病的实验室诊断 病原学诊断 免疫学诊断 分子生物学诊断 病原学诊断 a 直接涂片或组织切片检查法 将所采集的检查病料直接涂抹或压印在玻片上，用姬氏染液或瑞氏染液染色镜检。发现典型的新月形滋养体或组织包囊可确诊。此法诊断弓形虫病非常准确，但检出率低。 b 动物接种法 动物接种法即将病料研磨后过滤加PBS或液体病料离心浓缩，取上清腹腔接种幼龄小鼠，观察发病情况。如未获成功，则可采取小鼠的肝、脾、淋巴结及脑等组织制成组织悬液再腹腔接种健康小鼠，如此盲传2-3代，可提高检出率，之后没有发现弓形虫虫体才可以认为阴性。 病原学诊断方法简单，结果可靠，但该方法检出率低，耗时长，而且有动物接种法有扩散病原的危险。亦由其特异性和敏感性的原因，常常导致诊断的错误。新的弓形虫病诊断方法主要在于提高敏感性和特异性，以及使操作更为简便、快速。 免疫学诊断 a 间接血凝实验（IHA） 其原理是建立在抗原与抗体特异性结合基础上的。本法具有操作简便、微量、快速、特异、廉价等特点，适合辅助诊断和大规模流行病学调查，也是国内各实验室最常用方法之一。但IHA存在着敏感性不很高，一般不能反应现症感染的缺点。 b 酶联免疫吸附试验(ELISA) ELISA可检测抗弓形虫的IgM、IgA、IgG、IgE抗体及C抗原(循环抗原)。 ELISA用于诊断弓形虫病作了较多研究，衍生出多种方法，如间接ELISA、PPA-ELISA(金萄菌A蛋白-酶联免疫吸附试验)、ABC-ELISA(生物素-亲和素过氧化物酶联免疫吸附试验)、BA-ELISA(亲和素生物素ELISA)、Dot-ELISA (斑点酶联免疫吸附试验)、双夹心ELISA等。 目前研究表明ELISA具有敏感性高、特异性强、检测速度较以往的检测方法有了很大提高、受检样本多等特点，然而目前我国弓形虫病诊断试剂盒品种繁杂，质量参差不齐，无统一标准，给弓形虫病的诊断与防治造成严重危害。 双抗体夹心ELISA 间接ELISA 目前研究表明ELISA具有敏感性高、特异性强、检测速度较以往的检测方法有了很大提高、受检样本多等特点，然而目前我国弓形虫病诊断试剂盒品种繁杂，质量参差不齐，无统一标准，给弓形虫病的诊断与防治造成严重危害。 c 间接荧光抗体试验（IFAT） 　 是以完整的弓形虫为抗原，采用荧光标记的二抗检测特异 IgM和IgG。 IFA具有简便、快速、敏感、特异和重复性强等优点，检测弓形虫表面膜抗原的特异性抗体IgM和 IgG。感染后的第7天至第8天，首先出现IgM，持续数周至数月，如果IgM水平升高，提示有近期感染。 分子生物学诊断 1 核酸分子杂交(DNA探针技术) 　 核酸分子杂交技术是用一定的示踪物对特定基因序列的核酸片段进行标记，通过与待测样本中互补片段的特异性结合来进行诊断。由于核酸分子杂交的高度特异性和检测方法的高度灵敏性，使得该技术成为分子生物学领域内应用最广泛的基本技术之一。20世纪80年代末，DNA探针检测弓形虫病的方法应用较多。 从探针来源看，目前用于弓形虫检测的探针多为特异性DNA克隆片段或人工合成的寡核苷酸探针，但其制备需要一定条件，费用较高。 2 聚合酶链式反应（PCR） PCR是近年来学者们研究的热点之一，已广泛应用于弓形虫DNA的检测，具有敏感、特异、检测迅速等优点。PCR成功与否的关键在于特异而敏感的引物的选取。目前，常用的检测弓形虫的靶基因有P 3O基因、B 1基因、529 bp片段,它们在弓形虫基因组中均具有高度保守的特点。 a 多重PCR 多重PCR是为了同时检测几种病原体而在一个反应体系中加入多对引物以扩增不同的DNA片段，操作快速简便