第14章 基因突变.ppt

(3)羟胺(NH2OH) 羟胺使碱基上的氨基羟基化从而引起错配 羟胺胞嘧啶 胞嘧啶 腺嘌呤 （4）嵌入剂 如溴化乙锭（EB）、吖啶橙、吖啶黄、原黄素等一些核酸染料，是一些扁平分子，可以嵌入DNA的碱基对之间，造成单个核苷酸的插入/缺失，移码突变； EB会改变质粒分子的构型，改变其电泳迁移率； 结合了EB的DNA，其转膜、杂交效率均会降低。 4、辐射引起的变异 使胞嘧啶变为水合胞嘧啶，在复制过程中误配 使胸腺嘧啶产生TT二聚体 TT二聚体影响DNA突变表现在 干扰DNA双螺旋结构，防碍DNA复制 TT二聚体有时不能修复，从而妨碍细胞的生长 紫外线引起变异的特点 水合胞嘧啶 紫外光对实验操作的影响 紫外光和可见光对克隆效率的影响的对比： 　 ?　　割胶分离DNA时，分别暴露在紫外光和蓝光下30秒，比较两种情况下的克隆效率。结果表明在可见光下分离的DNA的克隆效率高于紫外光下分离的DNA 80倍以上。 紫外光下短暂的照射还会影响后期的PCR、体外转录甚至杂交实验。 由于转座因子或DNA片断的插入导致基因失去功能 5、DNA插入引起突变 同义突变（synonymous mutation） 沉默突变（silent mutation） (二)、碱基替换对遗传信息的影响 错义突变（missense mutation） 无义突变（nonsense mutation） 终止突变（stop mutation） 移码突变（frameshift mutation） 第三节 生物体的修复机制 紫外线引起的DNA损伤的修复，大致上通过3个途径： (1)在损伤部位就地修复——光复活(photoreactivation) (2)取代损伤部位——暗修复或切除修复(excision repair) (3)越过损伤部位而进行修复——重组修复(recombination repair) 一、光复活 光复活在可见光下，可吸收蓝光的能量，使二聚体(C-C键)解开成为单体，释放酶，完成修复过程。 二、暗复活(又称切除修复excision repair) 切除修复也称核苷酸外切修复，是一种取代紫外线等辐射物质所造成的损伤部位的暗修复系统。 1. 步骤： (1)切开(修复内切酶)：在糖-磷酸骨架上形成切口(5’-P和3’-OH) (2)合成DNA (DNA Pol I)取代损伤的DNA链 (3)切除(外切酶切除)：被置换的DNA片段5’-3’ (4)连接(ligase) 2UvrA与UvrB结合识别受伤DNA 2. 切除修复的酶促过程： UvrA脱离，与UvrC结合 (切开) UvrB和UvrC使TT二聚体形成12碱基缺口，并随UvrC脱离 UvrB脱离，在Pol I合成缺口，DNA ligase连接 三、重组修复(复制后修复) 重组修复(recombination repair)：必须在DNA进行复制的情况下进行，故又称复制后修复(post-replication repair) 重组修复步骤： 越过TT dimer，在合成子链上形成gap 由母链与带gap子链重组 填补子链缺口 母链缺口由DNA聚合酶填补 四、SOS修复 当细胞中的DNA受到大规模损伤，严重影响其生存时，被诱发出来的一种高效修复机制，由于保真性差，出错几率大，是一种保命机制。 修复机制：通过式修复和切除式修复。 (一) 大肠杆菌营养缺陷型的检出 基本培养基 野生型 正常生长 缺陷型 不能生长 加入缺陷型细菌所不能合成的物质，如氨基酸、维生素、抗生素 能够生长(添加的物质就是缺陷的基因) 1. 基本培养基添加物的筛选 第四节 突变的检出 2. 青霉素法 青霉素法的作用是抑制细菌细胞壁的合成，只能杀死正在生长繁殖中的细菌，而不能杀死处于休止状态的细菌 野生型细菌 基本培养 基(青霉素) 突变型细菌 补充培养基 筛选出某种营养缺陷型 杀死野生型 (三)果蝇突变的检出 1.果蝇伴X隐性致死(或非致死)突变的检出 果蝇的ClB（Crossover-suppressor lethal Bar technique）测定法: 果蝇的ClB是在X射线处理的果蝇的子代群体内发现的，属于X染色体的一种倒位杂合体的雌蝇。C(倒位)，l(致死)，B(棒眼) 原理：倒位杂合体的重组率下降，因此可以把倒位染色体的倒位区段作为抑制交换的显性基因或标志，使得隐性致死基因l与棒眼基因B之间不会因重组交换而分开，即用B基因对l基因进行标记。 结果： 2♀：0♂ (致死突变) 2♀：1♂ (非致死突变) 2. Muller对ClB法的改进：Muller-5(?5) Muller-5(?-5)品系X染色体带有B(Bar)和wa(杏红眼)、sc(scute，小盾片少刚毛)，称Basc，X染色体上具有重叠倒位，可以抑制?5与野生型X染色