第1节 DNA聚合酶.ppt

第三章 DNA的复制 第1节 DNA聚合酶 1. DNA合成的化学基础 * 回顾 1. 核酸的变性 2.引起DNA变性的因素 ?加热 ? PH ?有机试剂 3.熔点（Tm） 4. 影响DNA的Tm值的因素 ? G-C含量 ?介质中离子强度 回顾 5. 核酸的复性 6.核酸的杂交 ?Southern blotting ?Northern blotting 7. 核酸的分离 ? 琼脂糖 ?PAGE 1.1 DNA合成的底物： ① dATP dGTP 、dCTP、dTTP P196 1.1 DNA合成的底物： ② 引物模板接头（primer-template junction) 1. DNA合成的化学基础 P196 1. DNA合成的化学基础 1.2 DNA的延伸合成 P197 △G=-3.5 kcal/mol △G=-7 kcal/mol Keq=105 XTP+(XMP)n→(XMP)n+1+P～P XTP+(XMP)n→(XMP)n+1+2Pi 2.1 DNA聚合酶对核苷酸底物的选择 2.1.1 dNTP的选择 P198 2. DNA聚合酶的作用机制 2.1 DNA聚合酶对核苷酸底物的选择 2.1.2 NTP和dNTP的选择 P199 2. DNA聚合酶的作用机制 2.2 DNA聚合酶的结构 P203 2. DNA聚合酶的作用机制 拇指域 手指域 手掌域 Doublié S, et al. Nature. 1998, 391(6664):251-258. 2.2 DNA聚合酶的结构 2. DNA聚合酶的作用机制 P204 2.2 DNA聚合酶的结构 2.2.1 手掌域 ①催化功能 2. DNA聚合酶的作用机制 Doublié S, et al. Nature. 1998, 391(6664):251-258. 2.2 DNA聚合酶的结构 2.2.1 手掌域 ①催化功能 2. DNA聚合酶的作用机制 P203 2.2 DNA聚合酶的结构 2.2.1 手掌域 ② 检查碱基配对的准确性 2. DNA聚合酶的作用机制 Doublié S, et al. Nature. 1998, 391(6664):251-258. Template New strand Minor groove Base P203 2.2 DNA聚合酶的结构 2.2.1 手掌域 ①催化功能 ②检查碱基配对的准确性 2. DNA聚合酶的作用机制 P203 2.2 DNA聚合酶的结构 2.2.2 手指域 ① 促进催化反应 2. DNA聚合酶的作用机制 P206 2.2 DNA聚合酶的结构 2.2.2 手指域 ① 促进催化反应 2. DNA聚合酶的作用机制 O helix Tyr Lys Template Primer Deoxynucleoside Phosphate Metal Arg P206 2.2 DNA聚合酶的结构 2.2.2 手指域 ② 有利于碱基的正确配对 2. DNA聚合酶的作用机制 P207 2.2 DNA聚合酶的结构 2.2.2 手指域 ① 促进催化反应 ② 有利于碱基的正确配对 2. DNA聚合酶的作用机制 2.2 DNA聚合酶的结构 2.2.3 拇指域 ①维持引物以及活性部位的正确位置 ②帮助维持DNA聚合酶与其底物之间的紧密连接 2. DNA聚合酶的作用机制 P207 2.2 DNA聚合酶的结构 2.2.3 拇指域 ①维持引物以及活性部位的正确位置 2. DNA聚合酶的作用机制 P207 2.2 DNA聚合酶的结构 2.2.3 拇指域 ②帮助维持DNA聚合酶与其底物之间的紧密连接 2. DNA聚合酶的作用机制 P208 *