细胞工程专业精简内容.docx

2.细胞生物学基础 ：细胞的大小：一般10－100μm8.T细胞介导的效应及机制：CD8+细胞：细胞毒性T细胞（CTL） CD4+细胞：炎症性T细胞（Th1） 辅助性T细胞(Th2)效应分子：穿孔素 颗粒酶（选择）9.肿瘤的免疫学治疗：1主动免疫治疗（疫苗） 2被动免疫治疗 3细胞因子治疗 4肿瘤的基因治疗 5 .中草药对杀伤细胞的调节作用 6.单克隆抗体的生物导弹作用10.被动免疫治疗：（大题）1）导向治疗：放射免疫治疗 抗体导向的化学疗法 抗体导向酶解前药疗法免疫毒素导向疗法 双功能抗体导向疗法2）过继免疫疗法：LAK（外周血淋巴细胞经IL-2激活） TIL（实体瘤中分离淋巴细胞经IL-2激活） CIK（多种细胞因子诱导的杀伤细胞）11.LAK TIL杀伤肿瘤方式：LAK的作用机制：与靶细胞结合后，分泌细胞毒颗粒，Ca2+存在时，释放其中的穿孔素、TNF样分子等杀伤介质，直接杀伤靶细胞通过LAK细胞表面的杀伤分子直接杀伤靶细胞。通过分泌其他细胞因子间接杀伤靶细胞TIL的作用机理 ： 诱导肿瘤细胞凋亡：分泌细胞因子+释放穿孔素12.多种细胞因子诱导的杀伤细胞CIK：将人外周血或骨髓单个核细胞在体外用多种细胞因子与CD3分子的单克隆抗体（CD3McAb）共培养获得的杀伤细胞。它是一种高效杀伤活性的异质性细胞群13.CIK细胞的制备：外周血—— 分离获取外周血单个核细胞 ——诱导活化(IL-2,,Anti-CD 3McAb,IFN-γ,PHA) ——高效扩增（IL-2, Anti-CD3McAb,IFN-γ,PHA）——收集CIK，全身/局部回输。14.PHA（植物血凝素）：促进淋巴细胞分裂增殖；提高巨噬细胞的吞噬作用；促进骨髓造血功能，提升白细胞；杀伤病毒侵袭的细胞；诱生干扰素；体外抑制人食管癌及肝癌细胞、艾氏腹水癌；延长带瘤小鼠的生存期15.主动免疫治疗：（一） 细胞免疫 1基因修饰的肿瘤细胞 2基因修饰的树突状细胞（DC）（二）分子疫苗 1胚胎抗原疫苗 2与肿瘤发生有关的病毒疫苗 3癌基因产物的分子疫苗 4抗独特型抗体疫苗（三）核酸疫苗16某些淋巴因子的调节作用：用IFN、IL-2等处理淋巴细胞均可大大增强NK、K、TC细胞的杀伤效应17.单克隆抗体的生物导弹作用：1杀肿瘤的毒性药物挂在抗体上 2输入患者体内 3若与上述淋巴因子制成联合剂型效果更好18.NK细胞毒活性检测方法：（知道） 1 血红蛋白酶释放法 2 同位素释放法 3 乳酸脱氢酶释放法（LDH） 4 MTT比色法（同时检测原理也需要知道 太多了懒得打了 PPT有）单抗！淋巴细胞杂交瘤和单克隆抗体：单克隆抗体技术的核心是用骨髓瘤细胞与经特点抗原免疫刺激的B淋巴细胞融合得到杂交瘤细胞，杂交瘤细胞既能象骨髓瘤细胞那样在体外无限增殖，又具有B淋巴细胞产生特异性抗体的能力。因此，单克隆抗体技术又称为杂交瘤技术。杂交瘤技术原理：聚乙二醇（PEG）：细胞融合剂，使免疫的小鼠脾细?胞与小鼠骨髓瘤细胞融合；HAT培养基的选择培养：经反复的免疫学检测筛选和单个细胞培养(克隆化),获得杂交瘤细胞系；单克隆抗体生成：接种杂交瘤?细胞于小鼠腹腔，腹水中即可得到高效价的单克隆抗体。（1）骨髓瘤细胞的准备用于细胞融合的理想骨髓瘤细胞应该是①细胞株稳定，易于传代培养；②细胞株自身不产生免疫球蛋白或细胞因子；③该细胞是次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转换酶（HGPRT)或胸腺嘧啶激酶（TK）的缺陷株；④能与B细胞融合成稳定的杂交瘤细胞；⑤融合率高。培养骨髓瘤细胞：①选择对数生长期的细胞进行传代培养②细胞形态：浑圆、透亮、均一、排列整齐③避免细胞返祖：定期用8-AG(8-氮鸟嘌呤)处理细胞④注意事项：切忌过多传代培养，可将细胞分装冻存于-80℃或液氮及干冰中（2）致敏B淋巴细胞的准备多采用与骨髓瘤细胞同源的纯系BALB/c小鼠细胞性抗原：（1~2）×107/只，不加佐剂，2~3周重复一次可溶性抗原：首次，完全福氏佐剂+100ug抗原，3~6周，100~200ug抗原，融合前3天，加强免疫免疫脾细胞的制备：1×108的淋巴细胞 无菌手术（3）细胞融合细胞融合剂：分子量：4000D 的PEG是最常用的细胞融合剂;作用机理：诱导细胞膜上脂类物质结构重排，使细胞膜易打开而有助于细胞融合。细胞融合方法①骨髓瘤细胞与脾细胞的比例为1：2～5；②1ml 50%的PEG（无菌，预温37℃）在1分钟内滴完,静置90秒；③时间一到,将事先准备的培养液一滴一滴加入,停止PEG作用；④根据细胞数量加入HAT培养基，使之分加到96孔板中，使每孔细胞数为（0.5～1.5）×105个；⑤融合后7天，换用HT培养液（4）杂交瘤细胞的选择HGPRT酶：次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转换酶TK酶：胸腺嘧啶激酶HAT培养基：