基因工程复习知识点.doc

基因工程复习资料 一、知识点 1.根据基因工程的定义，能替代基因工程的术语。 2. 含有II型限制性内切酶切位点的DNA 片段的特点。 3.已知一双链DNA分子，分别用限制酶Ⅰ、限制酶Ⅱ切割单独切割得到不同片段；同时用限制酶Ⅰ和限制酶Ⅱ切割时，得到另外的片段，据此分析该双链DNA分子结构及酶切位点情况。 4．质粒分子生物学的描述。 5．在植物基因工程中广泛使用的载体。 6．质粒带有(互补的 lacZ( 标记基因，那筛选培养基中加入显色底物和诱导物分别为？7．载体常用的选择性标记：抗生素、生化标记、营养缺陷型标记的包括哪些 （要能区分缩写符号）。 8．DNA双链是靠什么化学键维持？ 9．能有效区分重组子与非重组子的是方法有哪些？10．离体cDNA 合成中所涉及的工具酶是有哪些？11．强化基因转录的元件是哪些？ 12．基因调控元件中属于负调控顺式作用元件的是哪些？ 13．关于包涵体的叙述。 14. 在单子叶、双子叶植物及动物的遗传转化过程中，应用最成功的间接转化法分别是什么 15. 在对转基因植物进行分子鉴定时，检测外源基因的整合、表达、转录，分别可以采用哪些方法？ 16．细菌存在限制-修饰的现象，其生理意义是什么？ 17．Taq DNA 聚合酶的发现使得 PCR 技术的广泛运用成为可能，是利用其哪个特点？ 18．关于柯斯质粒（cosmid）描述。 19．Cosmid、(-DNA 、 Plasmid几种常用载体的装载量大小比较 20．载体质粒 pBR322上的两个选择性标记： Apr 、 Tcr。它们分别含有一个单一酶切位点： Pst I 、 Sph I。若将一外源基因插入Apr中的Pst I位点，那么转化子和重组子如何筛选，若插入Sph I又如何筛选？21．DNA-DNA,DNA-RNA分子杂交的化学原理是什么（靠什么维持其双链稳定性）？22．cDNA 法获得目的基因的特点表现为？ 23．原核生物启动子的特征是有哪些？ 24．强化 mRNA 翻译的元件是哪些？ 25．高等哺乳类动物基因在大肠杆菌中高效表达时，包涵体形成的原因是？ 26.动物基因转移法中的胚胎干细胞法有何特点？（ ） 27. 如何正确理解基因漂移？ 28.熟悉pBR322、pUC18/19载体的组成元件及作用、简写所代表的含义。 29. 基因表达载体表达盒的组成必需含有启动子、终止子、复制原点、目的基因、报告基因 30.动物基因转移过程中，实际应用中主要有哪些方法？ 二、专业术语 1.基因工程；2.酶的星号活性；3.黏性末端；4.人工染色体；5.质粒的不相容性；6.核酸分子杂交；7.逆转录PCR；8.RACE；9.简并序列；10.基因组文库；11.衔接物；12.感受态细胞；13.核糖体结合位点；14.基因漂移；15.同质性原则。 三、思考题 1. DNA连接酶有何作用特点和使用价值？ 2.质粒及其基本特征是什么？ 3. PCR技术的原理和基本过程是什么？ 4. pBR322质粒载体有tetr和ampr表型，如果在tetr中有一EcoR I的酶切位点，现用EcoR I切割载体进行基因重组，如何利用抗生素变化筛选含有插入片段重组体？如果EcoR I的酶切位点ampr又如何？（插入失活法 ） 5.基因组DNA文库构建需要的满足条件及其基本步骤是什么？ 6. 原核生物基因表达与调控具有怎样的特点？ 7. 原核生物基因表达与调控具有怎样的特点？ 8.如何以pUC19为载体进行DNA片断克隆（全过程）？ 9. Klenow片段和大肠杆菌DNA聚合酶I有何异同？ 10.载体及其在基因工程时必须具备的条件？ 11.影响DNA琼脂凝胶电泳的因素有哪些？ 12.多种载体中都采用(-互补的方式筛选重组子，如何利用(-互补进行重组子筛选?(过程和原理) 13. cDNA文库构建的需要满足条件和基本步骤是？ 14. 大肠杆菌表达载体的必须结构元件及作用？ 15. 根据pBR322的结构图，利用BamH I限制性内切酶切割外源DNA片断后，怎样进行这一重组过程？怎样选择重组的转化菌？ 如果利用Pst I切割，又如何重组、选择？