环境微生物多样性观察.doc

环境微生物多样性观察 徐萍 （南京师范大学，教师教育学院） 摘要：本文着重于环境微生物的观察。主要从以下四步来完成：环境微生物的采集与分离、不同微生物类群菌落的比较及细菌多样性的观察与鉴定、放线菌、真菌、霉菌高等真菌形态观察、自然界中噬菌体的分离。通过以上阶段性的研究学习微生物采集、分离、菌落鉴定等基本实验室操作方法；树立无菌意识。 前言 微生物在自然界中可以说是无处不在。不管我们生活的周围环境，还是我们体内都有大量微生物的存在，微生物不光分布广，而且种类繁多，数目庞大，让我们无法想象。我们每时每刻都在与微生物打交道，所以微生物与人类的关系非常密切。到底微生物与人类有着怎样的关系?实际上微生物与人类的关系有两个方面：有对人类有益的一面，也有对人类有害的一面。 微生物与人类日常生物 人类要生存，就必须有食物。我们每天吃的很多的食品的制作都离不开微生物。比如：我们每天吃的馒头、面包、泡菜等食品。我们喝的营养丰富的酸奶；各种酒类-调味品中的醋、酱油它们都是经过微生物的发酵制作出来的。还有我们吃的营养丰富的菌类，如各种蘑菇、木耳，银耳。还有药用价值的灵芝，冬虫夏草也微生物。 微生物与人类健康 在人体肠道中有很多微生物，其中要有大肠杆菌，乳酸杆菌等，这些细菌生活在人的肠道中能合成核黄素，维生素k等多种维生素以及氨基酸，以供人体吸收利用。 微生物与农、牧 植物生长需要大量的营养物质，腐生性微生物能将人、畜粪便、植物枯枝落叶分解，并能转换成植物能够吸收利用的养料。如果没有这些微生物，植物就会由于没有充足的营养物质而无法正常生长发育。有的微生物能将空气中的氮，转化成植物可以吸收的含氮物质。这样可以减少对农作物的施肥量。如根瘤菌。 微生物与环境 近年来随着人口的剧增，工业的迅速发展，环境受到了严重的污染。其中水域的污染是非常严重的。以前清澈见底，鱼虾嬉戏的景象再也看不见了。很多河流都变成了臭气熏天的臭水河。有些水域会出现赤潮。这都是水域受到严重污染的结果。水域污染治理的方法很多，在众多的污水、废水处理方法中，生物学的处理方法具有经济方便，效果好的突出优点被广泛应用。有些微生物能将水中的含碳有机物分解成二氧化碳等气体。将含氮有机物分解成氨，硝酸等物质。将汞、砷等对人体有毒的重金属盐在水体中进行转化，以便回收或除去。在以后的污水处理。 微生物与自然界的物质循环 地球上每年都有大量的动，植物死亡，腐生性微生物会把这些动植物遗体分解，并能转换成植物能吸收和利用的养料从而促进了自然界的物质循环。试想，自然界中如果没有这些微生物，那么地球上的动植物遗体早就堆积如山了。那么我们人类将会由于没有生存空间而无法在地球上生存、繁衍。[1] 微生物无处不在，也与我们人类密切相关，所以我们有什么理由不去研究微生物呢？让我们一起走进微生物奇妙王国吧！ 1环境微生物的采集与分离 1.1实验目的 了解环境与微生物的关系及其多样性；学习环境微生物（土壤、水体、人体等）采样的基本方法；初步掌握观察微生物的实验方法；了解光学显微镜显微观察的基本操作和油镜头的使用方法； 了解并熟悉微生物的稀释涂布分离方法与技术；树立严格的无菌意识和掌握正确的无菌操作方法。 1.2实验内容与方法 天然环境微生物样品的采集、分离、培养 1.2.1环境微生物样品采集（分组采集） 空气中微生物采集：牛肉膏蛋白胨平板和马铃薯培养基，打开皿盖在空气中暴露5min后盖上皿盖（全班室外和室内各一个）。 土壤微生物采集：五点对角法取样，混匀，称取1 g土壤放入含9 ml无菌水的三角瓶中（内含玻璃珠数粒），振荡分散。 水体微生物采集与稀释：用灭菌三角瓶分别取污水和水库水约100 ml。 1. 2.2样品稀释 土壤样品的稀释：称量2 g土壤放入含18 ml无菌水的三角瓶中（内含玻璃珠数粒），混匀后用移液枪和枪头在离心管中进行10倍比逐级稀释成10-2,10-3的梯度样品。 水体微生物样品的稀释：将污水和洁净水, 分别稀释成10-1,10-2, 10-3等系列。 土壤加入水后已稀释了10倍!0.1ml 样品＋0.9ml 无菌水逐级稀释的样品要混匀！ 1.2.3样品的平板稀释涂布取100μl稀释液于固体培养基平板表面中央，用无菌的玻璃涂棒将样品液滴均匀涂布分散在平板表面。 土壤样品：10-2,10-3样液（单号组10-2，双号组10-3） 1块 牛肉膏蛋白胨培养基 1块 高氏一号培养基 1块 马铃薯培养基 水体样品：库水:10-1，10-2, 污水:10-2,10-3样液（单号组库水，双号组污水） 2块 牛肉膏蛋白胨培养基 涂布时要涂至培养基表面略干为止！ 1.2.4培养 将平板倒置放入培养箱内进行培养。 牛肉膏蛋白胨培养基： 30℃ 24 h 高氏一号培养基：