在实验性注射杆菌冷菌后三种鲑的病理学和免疫组织化学.doc

在实验性注射黄杆菌冷菌后三种鲑的病理学和免疫组织化学 [摘要]为了评估黄杆菌的易感性在不同物种之间的差异, 研究人员对虹鳟鱼，虹鳟（walbaum），海鳟，褐鳟，大西洋鲑，进行了实验。此外，还对病理变化和内脏器官中的细菌分布的差异进行了研究。在腹腔注射两个不同剂量：高剂量（HD）1 107菌落形成单位（CFU）鱼）和低剂量（LD）1 106 CFU鱼）1细菌。LD组的死亡率介于0和7.5％之间，HD组在55-70％之间不等。记录的死亡率在同种物种之间没有太大的区别。按照虹鳟鱼鱼苗综合征的临床症状和病理反应，三种物种在这两点上是很相似的。虹鳟鱼与其他物种相比，其脾脏的病变更明显。肾小管上皮细胞及造血组织坏死最突出的是虹鳟和大西洋鲑。在虹鳟和鳟鱼的肾小管上皮细胞内滴嗜酸性粒细胞两者很幸存的没有被感染。用免疫组化研究发现分布在内脏器官的细菌存在三种相似。 关键词：病理学，免疫组织化学，大西洋鲑鱼，黄杆菌，虹鳟鱼，海鳟鱼，易感性 引言 细菌性疾病（BCWD）和虹鳟鱼鱼苗综合征（RTFS）病，在世界许多地区的水产养殖地都有发生 (Holt 1987; Bernardet, Baudin-Laurencin Tixerant 1988; Wakabayashi, Horiuchi, Bunya Hoshiai 1991; Bustos, Calbuyahue, Montan?, Opazo, Entrala Solervicens 1995).。病因论理论是在1948年从美国少年乔霍(Walbaum)溃疡的皮肤上提取出来的(Borg 1960)。黄杆菌冷菌的感染开始似乎只限制在北美。直到上世纪 80年代，黄杆菌冷菌的分离来自于德国的一次BCWD暴乱。（Weis 1987 年）。当时根据欧洲几个报告所述，在虹鳟鱼(Walbaum)身上发现了一种由黄杆菌冷菌造成的败血性疾病RTFS（Bernardet 等人 1988 ；洛伦岑达尔斯高，从奥勒 · 汉森，H?lyck，科斯岛，Mellergaard 科技森 1991 ；布鲁诺 · 1992 年 ；托兰索科技巴尔哈 1993年)。受影响的虹鳟鱼鱼苗的临床症状包括厌食症、 抑郁症和皮肤黑色素沉积症。（洛伦岑等人 1991 年 ；布鲁诺 1992年）。在尸检中病变的鳃、 肝、 肾、 脾肿大和肛门出血是最典型的特征(洛伦岑等人 1991 年 ；布鲁诺 1992年）。鱼苗和受BCWD 影响的生物会经常有皮肤和肌肉病变以及前背肛门附近及下颚的病变（霍尔特1987年）。RTFS与BCWD对鱼苗产生的外部病变似乎不太常见。 黄杆菌可能会影响所有的鲑鱼物种。银大麻哈鱼被视为对黄杆菌特别敏感物种（霍尔特，Rohovec 1993年）。另外一些经常被影响的种类是红鳟鱼（洛伦岑等，1991年）和香鱼（Temminck Schlegel），（Wakabayashi, Toyama Iida 1994）。据报道鲑鱼的钩吻（Walbaum）是不容易受其影响的(Rucker, Earp Ordal 1953; Wood Yasutake 1956）。 黄杆菌也被ISO相关病定性为非鲑鱼物种，安圭拉（L.），即鳗鱼，鲫鱼，鲤鱼升，异育银鲫，欧洲鲤 （L.），家鱼（L.） (Lehmann, Mock, Stu¨renberg Bernardet 1991)）和苍白的鲢鱼，宽鳍鱲（Temminck Schlegel），（IIDA＆mizokami 1996年）。 虽然针对黄杆菌冷菌感染的研究已经了很多年了，但通过不同种类之间的比较却没有给出确定的结论。由于海鳟，虹鳟，褐鳟，大西洋鲑，大西洋鲑的感染和病理上的差异，这项研究的目的在于评估任何易感性的物种差异。 材料和方法 实验用鱼 野生大西洋鲑鱼和鳟鱼从河达拉原产地运来，并在瑞典的商业养鱼场养殖虹鳟鱼卵，然后被运送到瑞典农业大学和乌普萨拉大学的病理系。在孵化前10分钟（埃文斯vanodine国际PLC，普雷斯顿，英国）将鸡蛋放在1％的消毒液中进行消毒。刚发育出的鱼苗被放在温度为10土0.5℃并具备良好通气环境的5 L水族馆中。卵黄囊被完全吸收后，开始对鱼苗使用商业鱼类所用的食物喂食，每日3次。 实验感染 一株从患肾脏病的大西洋三文鱼身上分离出的黄杆菌冷菌(1F-97），被用于所有的感染实验中。把该菌株存储在－70 摄氏度的蛋白胨和酵母膏盐（TYES）肉汤中（Holt等人，1993年）并增加了15％的甘油。将这批次冷冻的细菌接种于肉汤并将其放在15℃的摇床上进行48小时培养。细菌在磷酸盐缓冲液（PBS）中进行两次为期为10分钟，温度在5℃，重悬于PBS中，在1500ｇ的条件下收取。浊度测量分光光度计（Shimadzu UV-1601PC; Shimadzu Sci