第5章第六精液保存.ppt

第5章 家畜繁殖技术 精液保存的意义 1.精液经过保存后可以随时取用，实现异地配种，扩大配种数量，充分发挥优良公畜的配种效能，体现人工授精的优越性； 2.可以延长精子在体外的存活时间； 3.便于使用和运输。 现行的精液保存方式有3种，即常温(15～25℃)保存、低温(0～5℃)保存和冷冻(-79～-196℃)保存。常温和低温保存是液态，故称液态保存。 （一）精液的常温保存 常温保存的温度在15～25℃之间，温度允许有一定变动，所以又称为变温保存或室温保存。常温保存所需设备简单，特别适合猪的精液。 1.保存原理利用酸性环境抑制精子的活动，使其营养物质消耗减少，一旦PH恢复到7.0左右，精子还可以复苏，保持其受精能力。通过在稀释液中加入酸性物质，创造酸性环境，同时利用抗生素抑制微生物的繁殖，可以使精液保存一定时间。在一定范围内是可逆抑制，通常把pH调整到6.35左右。 2.稀释液配方(见课本128页)  （二）精液低温保存（保存温度0-5 ℃ ） 1.保存原理 精子在体温状态下，能够进行正常的代谢活动，随着温度的降低，精子的代谢活动减弱，当温度降至10℃以下时，精于的代谢活动受到抑制。营养物质消耗减少，代谢产物积累减缓，精子存活时间延长。但当温度回升，精子的代谢活动又逐渐恢复，并且不丧失受精能力，因此在低温下能延长精子的存活时间，故可达到保存目的。 2.保存方法 精液进行低温保存时，应采取逐步降温的方法，并使用含卵黄的稀释液，以防冷休克。 把包装好的精液放到0～5℃的低温环境中，经1～2h，精液即降至0～5℃。在保存过程中，要维持温度的恒定，防止升温。 3.低温保存稀释液 见课本126页配方表。 （三）精液冷冻保存 精液冷冻保存是利用液氮(-196℃)或干冰(-79℃)作冷源；将精液经特殊处理后保存在超低温下，以达到长期保存的目的。 精液冷冻保存是人工授精工作的一大进步，由于保存时间的延长，使精液的使用不受地区的限制，从而加快了家畜品种的育成和改良速度。 1.精液冷冻保存的原理 精子在超低温下，其代谢活动几乎停止（完全被抑制），使其在静止状态下保存下来，一旦升温又能复苏而不失去受精能力。其理论依据是玻璃化假说和甘油保护学说。 （1）玻璃化假说 物质的存在形式有气态、液态和固态，其中固态又分为结晶态和玻璃态。在不同的温度条件下，这两种形式可以相互转化。 A.结晶态 当精液的温度由冰点（0℃）缓慢降到-60℃左右时，精液中的水分由液态变成固态，冰晶颗粒大而均匀，叫做结晶态或冰晶化。对细胞内的细胞器构成巨大的破坏作用，因而，把这一温度区称为有害温区。缓慢降温形成冰晶化是造成精子死亡的主要原因。 B.玻璃态 但在特定冷冻剂参与下，精液由低温骤然降到-60℃度以下，精液变成固态时，冰晶颗粒细小而均匀，叫做玻璃态（化）。不会对细胞器造成破坏，从而达到长期保存的目的。 经试验证明，在0～60℃是冰晶形成的温度区域，叫做危险温度区。而且在逐渐降温的条件下才能形成。降温越慢，冰晶形成越大，尤以-15～25℃为甚。玻璃化必须在-60～-250℃的低温区域内，经快速降温，迅速越过冰晶化而形成。 (2)甘油保护学说 快速降温可使精液跨越结晶态进入玻璃态，但急剧降温会造成精子冷休克。研究表明，向稀释液中添加甘油，不但可增强精子的抗冻能力，而且又可防止冰晶化和精子冷休克。 甘油又名丙三醇，分子式CH2（OH）－CH2（OH）－CH2（OH），为高热能脂肪家族，其3个羟基（OH）为亲水基团，可与精液中的水结合，限制和干扰水分子的晶格排列，而产生冰晶；其烃链为疏水基团，朝向精子，可阻止精子的内外水分相互渗透，从而使精子保护在玻璃化膜中。 但是，甘油浓度高时，对精子有危害作用，应掌握甘油的用量。一般牛冷冻精液中甘油通常加入5％～7％。 除甘油外，其他多羟化合物如二甲基亚砜(DMSO)、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、糖类等都具有抗冻作用。 2.精液冷冻保存稀释液配方（见课本） 3. 冷冻精液制作方法 牛的精液冷冻已普及，现以牛精液冷冻为例，将精液冷冻制作技术叙述如下： (1)采精及精液品质捡查 精采精后，立即进行精液品质检查，制作冷冻精液的精子活率应达到0.7以上。 (2)精液稀释 根据冻精的种类、分装剂型和稀释倍数的不同，选择合适的稀释液，按照精液的稀释方法进行稀释。稀释后取样在38-40摄氏度下镜检活率不低于原精液。现生产中多采用一次或两次稀释法。 3.降温平衡 采用一次稀释法，由于稀释温度为30℃，需经1—2h缓慢降温至0-5℃，以防冷休克的发生。平衡是降温后，把稀释后的精液放置在0-5℃的环境中停留2-4h，使甘油充分渗入精于内部，起到膜内保护剂作用的过程。 4.精液的分装 现行冻精常采用颗粒、细管和袋装等分装方法。