液相色谱常见问题及处理方法(LC-MS).ppt

* 1. 高效液相色谱分析方法的建立 2. 高效液相色谱仪常见问题及处理方法 3. 制备型高效液相色谱技术 4. 高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS） 高效液相色谱仪常见问题及处理方法 吸滤头 单向阀 柱塞密封圈 线路过滤器 手动/自动进样器 检测器 泵系统 材料：不锈钢烧结，孔径10μm 故障：堵塞 表现：管路中不断有气泡生成 措施：用5％～20％的稀硝酸，超声波清洗， 再用蒸馏水清洗 注意点：吸滤头拆下时不得将塑料管剪断 一、吸滤头 二、高压泵 单向阀结构 吸液冲程 排液冲程 出口单向阀 进口单向阀 泵头 抛光面 透明塑料垫片 宝石球 流动相 单向阀原理 吸液冲程 排液冲程 出口单向阀 进口单向阀 泵头 1. 单向阀 故障1：宝石球粘附于垫片 表现：泵无法吸液或排液，流路不通，柱压低或没有。 措施：1）用针筒抽单向阀的出口以产生负压， 使宝石球与垫片分开 2）拆下单向阀，放入异丙醇或水中， 用超声波清洗 故障2：宝石球或塑料垫片受污导致密封不好。 表现：系统压力波动大 措施：拆下单向阀，放入异丙醇或水中，用超声波清洗。 常见故障： 故障：密封圈磨损而导致 密封不良 现象：系统压力波动大或 漏夜 措施：更换密封圈 注意点：更换密封圈拆卸泵头前，柱塞杆复位 （P－SET） 2. 柱塞密封圈 流动相 泵头清洗管路 柱塞杆 密封圈 三、手动进样阀 1. 构造及使用原理 故障1：转子密封损坏 现象：漏液 原因： a 拧的太紧 b 样品太脏（过滤不充分） c 针头损坏或未使用液相色谱专用注射器 解决措施：更换转子密封，并在使用时注意保养。 故障2：载样困难 原因： 定量环堵塞 解决措施：清洗或更换定量环 2. 常见故障 样品过滤： 故障：系统压力过高、峰型变差（拖尾峰、前沿峰、分叉峰），保留时间改变等。 解决措施：清洗、填补、更换 正相柱清洗溶剂： 正庚烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇等 反相柱清洗溶剂：： 甲醇、乙腈、氯仿、异丙醇、0.05mol/L稀硫酸 注意：应排除操作不当引起的假象。 四、色谱柱 色谱柱的维护 1. 在使用新柱之前，最好用强洗脱溶剂在低流量下 (0.2-0.3 ml/min)冲洗 30 min，长时间未用的分析柱也要同样处理。 2. 定期使用强洗脱溶剂冲洗柱子。 3. 使用缓冲盐作为流动相后，要先用水（含有少量甲醇5~10%）冲洗，再用有机溶剂（甲醇）冲洗。 4. 净化样品。 5. 分离条件优化（防止鬼峰出现）。 6. 不使用时，两头要盖上盖子，避免固定相干枯。 7. 使用预柱。 8. 避免流动相组成及极性的剧烈变化（梯度洗脱） 9、避免压力脉冲的剧烈变化 肩峰或分叉峰产生的原因： 1. 柱子劣化 （柱头处产生不均匀的空隙） 2. 样品变化 （生成氧化物、分解物等） 判断标准： 所有的峰都产生有肩峰或分叉时则为柱子劣化。 延长柱寿命方法：（ 更新） 1、倒（反）冲柱 2、换过滤片 3、修补柱头 柱的补修 填料的取出 恢复实例 1. 更换氘灯（紫外检测器） 判断氘灯能量： 设定220nm波长，检查参比池能量，如能量低于800，需更换氘灯。（详细参照说明书） 操作注意点： 不要用手直接接触氘灯表面 五、检测器 2. 清洁样品池 表现：样品池和参比池能量相差较大； 检查方法：不同的仪器有具体的检查方法； 措施：用针筒注入异丙醇，清洗样品池；如污染严重，拆开样品池，将透镜等放入异丙醇中超声波清洗。 * * *