Engineered mTgase定点偶联.pptx

Engineered mTgase定点偶联提纲1.Tgase定点偶联的作用机理2.不同来源的Tgase作用底物广泛性不同。3.目前Tgase进行定点偶联的应用4.石药集团Engineered mTgase技术及该定点偶联方法应用效果。5.各种定点偶联方法的比较。6.总结转谷氨酰胺酶（Tgase）的催化作用机理图mTGase起催化作用的三联体：由在沟里的Cys64,Asp255和His274组成，因此需要其作用底物Gln和Lys（NH2-）需在物质的表面的灵活变动区。链不同来源的转谷氨酰胺酶(Tgase)在作用底物的广泛性上差异mTgaseG-Tgase考马斯亮蓝染色hGhhGhDMC+DTTEPO+DTTGCSFIFN a2bEPOGCSFIFN a2bEPO+DTTDMC+DTTEPO荧光成像图选择哪种酶？所选择的该种属的酶是否作用于我们的目标物？目前Tgase在抗体定点偶联药物方面的应用1、野生型Tgase作用于去糖基化的抗体的Q295。2、Innate Pharm的技术：对抗体Asn297进行突变，而产生突变的去糖基化抗体(链接)3、辉瑞的方法则是在抗体序列中插入一个含Gln的五肽tag (LLQGA)，即使抗体上有其它Gln存在，Tgase也能特异的识别该5肽上的Gln，而使药物连在5肽的Gln上。专利保护的肽段将该五肽插入到抗体的90个位点，有12个位点偶联效果好4、石药选择不改变抗体，而改变Tgase(Engineered mTgase)。使Tgase能作用于所有IgG1/2/4 Fc的Gln(Methods to make homogenous antibody drug conjugates) Dophen Biomed对bacterial transglutaminase (BTG或mTgase)进行改造，主要加大了BTG活性部位蛋白袋结构 的开口，使得抗体表面的谷氨酰胺能够靠 近到BTG酶起催化作用的半胱氨酸残基部位，这样就能让酶发挥催化作用而使药物定点偶联到抗体恒定区表面的谷氨酰胺残基Q295上。mTgase催化蛋白上的Gln位点越少，则此mTgase的选择性越高。这篇文章中提到，提高mTgase的选择性方法：1.通过在mTgase的 N-末端的增Met,Ala_Pro或Gly_Pro2.突变氨基酸（G250S或G250T）上表看出不同来源的Tgase通过突变或增加N-末端氨基酸所带来的选择性提高程度不一样。综上推测：石药对mTgase的改造应该是通过突变或序列的增减实现。Engineered mTgase 催化抗体偶联药物：一步法一步法将酶和linker毒素同时与抗体混合，需要抗体浓度20mg/ml以上Engineered mTgase 催化抗体偶联药物：二步法化学选择性配对两步法先用酶处理抗体，后进行偶联，对抗体浓度要求低Engineered mTgase与其它偶联技术的比较除Engineered mTgase技术外其它定点偶联技术无法利用现有抗体不同偶联技术的稳定性比较其它定点偶联技术比Engineered mTgase技术的稳定性差结论改造工具酶而不是抗体，能节省项目至少一年半的时间，更大限度的减少免疫源性风险。简单快速，转化产量高。动物实验证明酶法生产的定点ADC体内稳定性高，药效好。适合推广。