第二章药物分析方法——分析化学部分课件.ppt

二、薄层色谱法 (thin layer chromatography；TLC) 固定相（吸附剂或载体）涂布成一均匀薄层，点样，（密闭的容器中）展开，斑点显色，（与对照物质）比较进行定性定量。 （一）定性参数 比移值(Rf值) 溶质移动距离与流动相移动距离之比。（速度之比？） Rf =L/L0（定时展开） L为原点（origin）至斑点中心的距离，L0为原点至溶剂前沿（solvent front）的距离 与组分及色谱条件有关 相对比移值(relative Rf；Rr)Rr = Rf (i)/Rf (s)=L(i)/L(s) 与组分、色谱条件、参考物质有关。 Rr值可以大于1，也可以小于1。 重现性和可比性均比Rf值好，能消除系统误差（参考物质与组分在完全相同的条件下展开） （二）吸附薄层色谱的吸附剂和展开剂 吸附剂 1.硅胶：多孔性微粒，表面带有硅醇基，呈弱酸性。 原理：硅醇基(吸附中心)与极性基团形成氢键（吸附性）。 组分与硅醇基形成氢键（被吸附）的能力不同而分离。 　　 应用：酸性和中性物质的分离，如有机酸酚类、醛类等 2. 氧化铝碱性氧化铝(pH9.0)——分离中性或碱性化合物，如生物碱、脂溶性维生素等； 中性氧化铝(pH7.5)——分离酸性及对碱不稳定的化合物； 酸性氧化铝(pH4.0)——酸性化合物的分离。 活度也与含水量有关。 展开剂(流动相) 极性强的溶剂洗脱能力强 常用溶剂的极性强弱顺序： 　　　水＞酸＞吡啶＞甲醇＞乙醇＞正丙醇＞丙酮＞乙酸乙酯＞乙醚＞氯仿＞二氯甲烷＞甲苯＞苯＞三氯乙烷＞四氯化碳环己烷石油醚。 展开剂 选择原则：根据被分离物质的极性 Stahl简图：极性物质—活度低（活性级大）的吸附剂--极性展开剂混合溶剂 先用单一溶剂展开， 若Rf值太小，则加入一定量极性强的溶剂，如乙醇、丙酮等， 如果Rf值太大，则加入适量极性弱的溶剂(如环己烷、石油醚等)，以降低极性。 可加入一定比例的酸或碱,使斑点集中。 （三）薄层色谱操作方法 制板　均匀 点样　集中 展开　(多种方式) 预饱和 显色　 （四）定性和定量分析 定性分析比较Rf值或Rr值 、斑点颜色或荧光 常采用已知标准物质对照（同一板上展开） 多种展开系统的Rf值与对照品一致。 定量分析　 　洗脱法 　直接定量法1.目视比较法（如杂质限度检查方法）2.薄层扫描法 5.4 高效液相色谱法 一、高效液相色谱法的特点 feature of HPLC 二、流程及主要部件 process and main assembly of HPLC 2.主要部件 (2) 进样装置 (3) 高效分离柱 (4) 液相色谱检测器 化学键合固定相 4. 离子对色谱ion pair chromatography 气相色谱法与高效液相色谱法的定性参数是（），定量参数是（）薄层色谱法的定性参数是（）。 化合物A 在薄层板上从原点迁移7.6cm，溶剂前沿距原点16.2cm，计算化合物A的Rf值。若在相同溶剂系统中，溶剂前沿距原点14.3cm，化合物A的斑点应在薄层板上何处？ 精密称取黄芩颗粒0.1255g置50ml容量瓶中，外标法测定黄芩颗粒中黄芩素的含量，测得对照品溶液（5.98ug/ml）和供试品溶液的峰面积分别为：706436和458932，求黄芩颗粒中黄芩素的含量。 气相色谱仪和高效液相色谱仪的组成 简述气相色谱法和高效液相色谱法的主要异同点 薄层色谱法中，比移值的最佳范围是（） * * 第二章 药物分析方法——分析化学部分 长春中医药大学 学生:06级药事管理 一、柱色谱的实验操作 5.3 经典液相色谱法 (二)、加样 (三)、洗脱与馏分的收集 (一)、装柱 内径 : 柱长=1 : 10~20 湿装法和干装法 体积小 等份收集 (四)、化合物的检出 活度与含水量的关系：含水量高，活性级高，活度低。 活化：加热至100℃左右，除去吸附水提高活度。（注意温度不可过高） 分离效率：与其粒度、孔径及表面积等有关。 high performance liquid chromatograpphy, HPLC高效液相色谱法是采用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有填充剂（固定相）的色谱柱进行分离测定的色谱方法。经由进样阀注入的供试品，有流动相带入柱内，各成分在柱内被分离后，依次进入检测器，有记录仪、积分仪或数据处理系统记录色谱信号。特点：高压、高效、高速高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。 1.流程 (1) 高压输液泵 主要部件之一，压力：150～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高