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临床免疫学检验技术 江西省胸科医院：熊国亮 一、概述 免疫学检验是研究免疫学技术及其在医学检验领域应用的一门学科。免疫检验技术则重点阐述各类免疫学技术的基本原理、方法类型和临床应用。19世纪末相继建立了凝集试验、沉淀试验和补体结合试验等三大经典血清学试验，用于检测病原微生物的抗原或抗体对传染病的诊断起到重要作用。 一、概述 随着免疫学理论和实验技术的发展，放射免疫技术、荧光免疫技术、酶免疫技术、化学发光免疫技术、流式细胞免疫分析技术等免疫标记技术应用于临床免疫学检验，加快了免疫学检验的自动化、标准化进程，极大地提高了免疫学检验的灵敏度，拓展了免疫学检测范围，从检测免疫相关物质（抗原、抗体、补体、免疫活性细胞和细胞因子等）到检测体液中的微量物质（激素、酶、血浆微量蛋白、血药浓度、微量元素等）。 一、概述 免疫检验技术以其特有的特异性、敏感性和微量、快速、稳定等优势被广泛应用于临床医学。 二、免疫检验技术在临床免疫学检验的应用 1.传染病的免疫学检查 机体被细菌、病毒、支原体、衣原体、螺旋体等微生物感染后，常可在血清中出现与病原体相对应的特异性抗体，检测这类抗体有助于明确疾病的诊断（血清学诊断）。此外，还可以用含有特异性抗体的诊断血清鉴定相应的病原体及有关抗原，为确定传染的病原提供依据。 二、免疫检验技术在临床免疫学检验的应用 2.机体天然免疫的检测 主要是对各种吞噬细胞如中性粒细胞、NK细胞、单核巨噬细胞的功能进行检测以及检测在机体组织损伤、局部缺血、急性感染与炎症反应时升高的血浆蛋白，如C反应性蛋白，血浆中CRP浓度在急性心肌梗死、创伤、感染、炎症、外科手术、肿瘤浸润时迅速显著地增高，可达正常水平的2000倍。CRP是引发心脏病的最强烈的危险因素。 二、免疫检验技术在临床免疫学检验的应用 3.免疫球蛋白、循环免疫复合物和补体的测定 包括测定五类免疫球蛋白的含量、血清总补体活性及补体成分的含量和在多种疾病时血清中升高的循环免疫复合物。 二、免疫检验技术在临床免疫学检验的应用 4. 细胞免疫相关指标测定 检测淋巴细胞亚群和淋巴细胞的功能以及白细胞介素—2等多种细胞因子，用于判断机体细胞免疫功能状况。 二、免疫检验技术在临床免疫学检验的应用 5. 自身抗体测定 机体在发生自身免疫性疾病时，常可出现各自身抗体，用免疫学方法检测这些抗体，可为自身免疫性病的诊断、疾病状态判断和疗效监测提供依据。 二、免疫检验技术在临床免疫学检验的应用 6. 肿瘤标志物测定 免疫学方法定性或定量检测在肿瘤发生和增殖过程中由肿瘤细胞合成、释放或机体对肿瘤反应产生的一些生化物质，对肿瘤的筛查、鉴别诊断、治疗后病情监测及预后判断均有重要意义。 三、酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA） 原理 ：酶联免疫吸附试验是免疫酶技术固相酶免疫测定的一种技术，是将待测抗原或抗体先固定于固相载体表面，再用酶标记的抗原或抗体与已被固定的相应抗体或抗原发生特异性反应，加入酶底物及色原后呈色，呈色程度用吸光度（A）值表示，所测A值与待测抗体或抗原的水平呈相关关系。 三、酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA） 此法常用多孔聚苯乙烯反应板作为固相载体，读取结果需用酶标仪。标记抗原或抗体所用的酶常选择辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）等，HRP常用的底物有邻苯二胺（OPD）或四甲基联苯胺（TMB），碱性磷酸酶一般采用对硝基苯磷酸酯（P-NPP）作为底物，产物为黄色的对硝基酚，在405nm波长处有最高吸收峰。 三、酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA） 根椐方法和步骤不同可分为以下几种基本反应模式。 1.间接法 是检测样本中特异性抗体最常用的方法。将已知特异性抗原包被于固相载体上，加待检样本，若其中含特异性抗体则与固相抗原结合形成抗原—抗体复合物；洗弃未反应的成分，加酶标记抗抗体（一般为酶标记抗人IgG或葡萄球菌A蛋白），使在固相载体上形成抗原—待检抗体—标记抗体（或SPA）复合物；洗弃未反应的成分，加酶底物，终止反应后，在一定波长下用酶标仪测吸光度（A）值判定待测抗体的有无或含量。间接法的优点是制备 一种酶标记抗抗体（或SPA），只需更换不同的固相抗原，便可检测多种抗体。如HCV-IgG抗体的检测 三、酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA） 2.夹心法 夹心法有双抗体夹心法（测抗原）和双抗原夹心法（测抗体），两者试验步骤相同，但包被物、酶结合物和检测对象不同。双抗体夹心法用于检测相对分子质量较大