人体解剖学实验二十一运动对机体组织器官的影响.doc

实验二十一 运动对机体器官组织影响的实验研究 [实验内容] 设计实验方案，研究运动对机体器官组织的影响。 [实验目的] （一）使学生了解设计性实验的过程，了解动物运动负荷模型的建立。 （二）使学生学会对实验结果进行分析讨论，培养学生综合分析问题、解决问题的能力和团结协作的精神。 [材料与器具] 根据实验要求和实验室条件自行选择。 [方法与步骤] (一)把学生分成若干个组，4-6人为一组，要求各组自行设计一个运动模型。 （二）小组讨论，确定实验所要研究的器官组织。 （三）根据拟定的实验内容和目标，学生查阅文献，设计实验方案。 （四）确定实验对象、实验方法与步骤。 （五）明确分工，按照实验方案进行正式实验。 （六）对实验结果进行讨论，以小论文的形式写实验报告。 [实验设计方案及结果分析示例] 案例一 （一）实验内容 运动对消化系统器官的影响。 （二）实验目的 通过建立运动负荷模型，观察运动对消化系统各器官形态结构的影响。 （三）实验对象 SD大鼠18只。 （四）实验器材 大鼠饲养笼，大鼠饮水瓶，动物运动跑台，电子天平，电子称，ASP300组织处理机（LEICA），EG1160包埋机（LEICA），RM2145切片机（LEICA），HI1210展片机（LEICA），HI1220烤片机（LEICA），SP9000磨刀机（LEICA），水浴锅，奥林巴斯光学显微镜（OLYMPUS），载玻片，盖玻片，切片用石蜡，手术剪、镊子、刀，双面刀片，毛笔，数显式酸度计，量筒，烧杯，微量移液器，中性树胶，甲醛，无水乙醇，多聚甲醛，氯化钠，苏木精，曙红Y，二甲苯，盐酸，冰醋酸，氨水，乌拉坦。 （五）方法与步骤 1.建立运动负荷模型 采用健康雄性SD大鼠。实验动物由专门的实验动物中心提供，饲料采用国家标准啮齿类动物干燥饲料。实验大鼠一般为3月龄，其平均体重为190-250g左右，分为安静对照组、中等运动强度组和大运动强度组，每组6只，共18只。常规分笼饲养，自由饮水进食，常规光照，动物室温度为18℃～23℃，湿度40～60％。 实验大鼠适应喂养1 周后开始训练，采用递增强度的方式进行跑台运动，运动负荷参考Bedford的研究进行。具体训练方案如下： (1) 对照组：正常笼内生活状态，自由饮食，不运动。 (2) 中等运动强度组：每周 5天，共8周。适应性训练3天后开始增加运动时间和运动速度：第1 天，训练10min，速度10m/min，第2 天训练15min，速度10m/min，第3 天训练时间为15min，速度13m/min，如此，运动时间、速度隔日交替增加：先增时间, 递增时间5min, 递增速度3m/min。运动速度增至20m/min，运动持续时间增至60min后持续该强度和运动量。 (3) 大运动强度组：每 周 6 天，共8 周。适应性训练3天后开始增加运动时间和运动速度：第1 天 速度10m/min, 时间10min 。第2 天速度10m/min, 时间15min，第3 天速度13m/min, 时间15min。当运动速度增至20m/min，增加跑台坡度为5度，最终运动速度增至35 m/min，运动持续时间增至60min。 整个训练过程用电刺激来强迫大鼠进行跑台训练，电刺激1mA 。 2.动物取材与指标检测 根据立题切取消化系统相应的器官并进行组织切片和染色与观察。具体方法如下： (1) 取材与固定：实验大鼠断头处死，迅速摘取1.0×1.0×0.2厘米的大鼠肝或胰、胃、小肠、大肠等小长条组织块，放入固定液中直接固定24h，4℃冰箱保存。固定以后，在自来水下流水冲洗10分钟。 (2) 脱水与透明：脱水时常用70%、80%、90%、95%、100%各级酒精。每级10-30分钟。透明常用二甲苯。每次20-30分钟，进行2次。 (3) 浸蜡与包埋：将透明好的组织块放入石蜡，中间换二次石蜡，每次20-30分钟，温度调至略高于石蜡熔点的温度。将熔化的石蜡倒入包埋器中， 用热镊子把材料迅速移入包埋器中，并摆好位置，切记观察面向下摆放，并将包埋器移入水面，缓慢浸入水中。等石蜡完全凝结以后，从水中取出，并注明包埋块的名称、组别和日期等。 (4) 切片、展片与贴片：将材料连同周围的石蜡用解剖刀修切成梯形，四周离组织1-2毫米，前端离材料宜近。用少许石蜡将蜡块固定在木块上。将有蜡块的木块固定在切片机上，并调节切片刀固定器。调节切片厚度为7-10微米进行切片，并将切片用毛笔移在铺有黑纸的盘中。将切好的蜡带，放入温度为40-50度的水浴锅内，展平组织切片，取经过硅烷化处理过的载玻片，用解剖针把蜡带拖置载玻片上，注意摆放位置，玻片45-50度烘干。 (5) 脱腊与水化：把玻片放入盛有二甲苯的染缸中溶去石蜡（3分钟），再经第二缸（3分钟）。经100 %—95 %—90